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南京森貝伽生物科技有限公司

石蠟切片免疫組化染色實(shí)驗(yàn)

時(shí)間:2013-3-19閱讀:1117
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石蠟切片免疫組化染色實(shí)驗(yàn)步驟:

1.石蠟切片脫蠟至水:(石蠟切片染色前應(yīng)置 60 1 小時(shí))。

2.過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶:3%H2O2,室溫 10 分鐘(避光)。

3.蒸餾水洗:5 分鐘,2 次(置于搖床)。

4.抗原修復(fù):根據(jù)待檢測(cè)的抗原,選擇適當(dāng)?shù)姆椒ā?/span>

5PBS5 分鐘,2 次(置于搖床)。

6.正常血清封閉:從染片缸中取出切片,擦凈切片背面水分及切片正面組織 周圍的水分(保持組織呈濕潤(rùn)狀態(tài)),滴加正常山羊或兔血清(與第二抗

同源動(dòng)物血清)處理,37℃,15 分鐘。 附:正常血清配制或按試劑盒規(guī)定的濃度配制

1:20 比例, PBS 配制,每張切片需要量按 50?l+5 ?l (10%拋灑量計(jì) 。

7.滴加*抗體:用濾紙吸去血清,不洗,直接滴加*抗體,37 2 小時(shí)

8PBS5 分鐘,2 次(置于搖床)。

9.滴加*化的二抗,37℃,40 分鐘。

10PBS5 分鐘,2 次(置于搖床)。

11.滴加三抗 SAB 復(fù)合物),37℃,40 分鐘。

12PBS5 分鐘,2 次(置于搖床)。

13DAB  顯色,鏡下觀察,適時(shí)終止(自來水沖終止)。 附:DAB 的配制

14.自來水(細(xì)水)充分沖洗。

15.蘇木素復(fù)染,室溫,30 秒,自來水沖洗。

16.自來水沖洗返藍(lán),15 分鐘。

17.梯度酒精脫水:80%,2 分鐘 ? 95%,2 分鐘 ? 100%2 次,5 分鐘。

18.二甲苯透明:III(二甲苯)各 5 分鐘

19.封片:加拿大樹膠(或中性樹膠)封片。

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