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1.采用試劑盒,生物標(biāo)記的小鼠抗組蛋白單克隆抗體。
2.過(guò)氧化物酶(-POD)標(biāo)記的小鼠抗DNA單克隆抗體
3.鏈霉親合素包被的微孔板
6.溶解緩沖液
7.溫育緩沖液
8.底物緩沖液
1.培養(yǎng)細(xì)胞或離體細(xì)胞的裂解物細(xì)胞裂解步驟:收集細(xì)胞,離心后,用200µl溶細(xì)胞緩沖液重新懸浮,室溫下作用30min。
2.培養(yǎng)細(xì)胞的上清液
3.血漿(血清)
1.取樣品離心后(1 000r/min,10min),吸取20µl上清液,加入鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板孔中。
2.另加入80µl免疫反應(yīng)試劑含抗-DNA-POD、抗組蛋白-*及溫育緩沖液(按1︰1︰18混合),室溫下孵育2h(置搖床上,250r/min)。
3.取上清,用300µl溫育緩沖液洗滌3次,小心移去洗滌液。
4.加入100µl底物緩沖液,室溫下孵育使顏色變化至適合(置搖床上)。
5.盡快作比色分析(10min~20min內(nèi)),用底物緩沖液作空白對(duì)照,以波長(zhǎng)405nm,參考波長(zhǎng)492nm進(jìn)行檢測(cè)。
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