日韩午夜在线观看,色偷偷伊人,免费一级毛片不卡不收费,日韩午夜在线视频不卡片

上海隆壘生物科技有限公司

細(xì)胞凋亡檢測(cè)操作步驟之ELISA法

時(shí)間:2013-11-4閱讀:288
分享:
細(xì)胞凋亡檢測(cè)操作步驟之ELISA法
細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí),內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA,但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割,單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu),可通過(guò)檢測(cè)核小體判斷細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡事件。
一) 原理
細(xì)胞凋亡的發(fā)生,是由于鈣-鎂依賴(lài)性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp~200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),可特異性檢測(cè)細(xì)胞溶解物中的核小體片段。
二)材料與試劑

1.采用試劑盒,生物標(biāo)記的小鼠抗組蛋白單克隆抗體。

2.過(guò)氧化物酶(-POD)標(biāo)記的小鼠抗DNA單克隆抗體

3.鏈霉親合素包被的微孔板

4.DNA-組蛋白復(fù)合物,作為陰性對(duì)照。
5.ABTS底物

6.溶解緩沖液

7.溫育緩沖液

8.底物緩沖液

三)樣品

1.培養(yǎng)細(xì)胞或離體細(xì)胞的裂解物細(xì)胞裂解步驟:收集細(xì)胞,離心后,用200µl溶細(xì)胞緩沖液重新懸浮,室溫下作用30min。

2.培養(yǎng)細(xì)胞的上清液

3.血漿(血清)

四)操作方法

1.取樣品離心后(1 000r/min,10min),吸取20µl上清液,加入鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板孔中。

2.另加入80µl免疫反應(yīng)試劑含抗-DNA-POD、抗組蛋白-*及溫育緩沖液(按1︰1︰18混合),室溫下孵育2h(置搖床上,250r/min)。

3.取上清,用300µl溫育緩沖液洗滌3次,小心移去洗滌液。

4.加入100µl底物緩沖液,室溫下孵育使顏色變化至適合(置搖床上)。

5.盡快作比色分析(10min~20min內(nèi)),用底物緩沖液作空白對(duì)照,以波長(zhǎng)405nm,參考波長(zhǎng)492nm進(jìn)行檢測(cè)。

五)結(jié)果判定
按下列公式計(jì)算細(xì)胞釋放的單/低聚核小體片段的特別聚集值:
注:mU=吸收值(10-3)=雙孔吸收值的平均OD值-底物OD值,若樣品的吸收值超過(guò)比色測(cè)定范圍,應(yīng)適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。
 

 

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),環(huán)保在線對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。

溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買(mǎi)風(fēng)險(xiǎn),建議您在購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

在線留言
主站蜘蛛池模板: 松潘县| 浏阳市| 吕梁市| 介休市| 木兰县| 临邑县| 图片| 磴口县| 廉江市| 连城县| 稷山县| 牙克石市| 如东县| 儋州市| 堆龙德庆县| 中卫市| 丽江市| 丰顺县| 潞城市| 乐安县| 沐川县| 宜宾县| 邓州市| 临江市| 宿松县| 科尔| 京山县| 吉水县| 万载县| 饶河县| 从化市| 彩票| 蒙自县| 澄城县| 新宁县| 喀喇沁旗| 会理县| 张家口市| 鱼台县| 越西县| 哈尔滨市|