MTT溶液的配制方法
通常,此法中的MTT 濃度為5mg/ml。因此,可以稱取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸緩沖液(PBS)或無酚紅的培養基中,用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過程中,容器用鋁箔紙包住。
需要注意的是,MTT法只能用來檢測細胞相對數和相對活力,但不能測定細胞數。在用酶標儀檢測結果的時候,為了保證實驗結果的線性,MTT 吸光度在0-0.7 范圍內。
MTT一般現用現配,過濾后4℃避光保存兩周內有效,或配制成5mg/ml保存在-20度長期保存,避免反復凍融,小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管里,用的時候現配,直接往培養板中加,沒必要一下子配那么多,尤其當MTT變為灰綠色時就不能再用了。
MTT有致癌性,用的時候小心,有條件帶那種透明的簿膜手套.配成的MTT需要無菌,MTT對菌很敏感;往96孔板加時不避光也沒有關系,畢竟時間較短,或者你不放心的時候可以把操作臺上的照明燈關掉.
配制MTT時用用PBS溶解,也有人用生理鹽水配,60℃水浴助溶。
PBS配方:
Nacl 8g
Kcl 0.2g
Na2HPO4 1.44g
KH2PO4 0.24g
調pH 7.4
定容1L