核酸酶保護法是一種用于生物化學和遺傳學識別個人在異構RNA的提取樣品RNA分子細胞實驗室技術。 該技術可以識別一個或多個已知序列的RNA分子,即使在較低的總濃度 。提取的RNA先用混合反義 RNA或DNA探針是相輔相成的利益和互補鏈的序列或序列雜交 ,形成雙鏈RNA(或DNA-RNA的雜交)。.然后將混合物接觸到核糖核酸酶 ,專門切割單鏈RNA,但有沒有活動,對雙鏈RNA。當反應完成運行,容易RNA地區退化很短的低聚物或個別核苷酸 ;尚存的RNA片段,這些增加的反義鏈互補,從而所載利益的順序。
Probe探針
探針準備克隆基因在矢量控制下以下的推動者,SP6中,T7或T3的任何利益的一部分。這些發起人是*的DNA依賴的RNA聚合酶zui初從噬菌體特點。探針產生的放射性物質,因為它們是由體外轉錄使用放射性UTPs的準備。 無補的DNA或RNA的切割核酸。 當探頭是一個DNA分子, S1核酸當探針是RNA,可用于任何單鏈核糖核酸。因此,幸存的基因探針補只需通過放射自顯影檢測。
Uses用途
核酸酶保護實驗用地圖內含子和5'和3'末端的轉錄基因區域。關于原始細胞提取物中存在的靶RNA的量,可以得到定量的結果-如果目標是一個信使RNA ,這可以表明細胞中的基因的轉錄水平。它們也可以用來檢測雙鏈RNA的存在,這可能意味著RNA干擾存在。
Northern雜交是一種實驗室技術,產生類似的信息。它是慢,定量少,但也產生對靶RNA的大小的準確信息。 核酸保護法產品由于銷毀非雜交的RNA在核酸消化步驟的初始探頭的大小是有限的。