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1．為了洗脫細菌，將900ul的K91KanTerrific肉湯菌液加入裂解后的細胞，并于室溫下孵育20分鐘。2．將步驟1所得全部倒入含有9m1四環素濃度為0．2ug/ml的NZY培養基的50m1錐形...
[方法]1．將100ul含有2×1010個PEG—純化噬菌體顆粒的TBS，等量分加到多孔板各孔中，4℃孵育12小時。2．用PBST洗滌數次，在室溫下每孔加250/ll封閉液封閉2小時。3．用封閉液稀釋...
[方法]1．用無菌塑料吸嘴挑取一個AmpR噬菌粒菌落（直徑大約lmm）并將其轉入到0．2mlMicroAmp反應管中，內含20u1洗脫緩沖液。在GeneAmp9600PCR儀中，95℃加熱樣本10分鐘...
天然V區可以被看作是在經歷過或未經歷過抗原刺激的淋巴細胞中所發現的結構。結果，有些擴增的V基因將會是重排的肝系基因，而另外的則含有B細胞與抗原相遇所誘導產生的突變體。這些基因擴增所用引物可以識別V基因...
從天然V基因中制備噬菌體抗體文庫時，有多種不同B細胞（即V基因）來源可供選擇。一般而言，可在兩種V基因之間做出選擇：一種是未經歷體細胞突變的V基因[天然的且一般是免疫球蛋白M（1gM）]，一種是發生過...
[器材和試劑]●PCR試劑和設備●1ug任何舍有scFv及（GIy4Ser）3接頭的載體●RHuJH引物、RHuVκ引物和RHuVλ引物，10pmol/ul[方法]1．在0．5ml微量離心管內配制用于...
[方法]1．在0．5ml微量離心管內配制以下PCR反應混合液。配制成2個“反應管”，1個含有V。文庫DNA，另1個則含有Vl文庫DNA。反應管對照1對照2●scFV接頭DNA（100ng/ul）1．0...
[器材和試劑]●用于細菌培養的無菌96孔圓底微量滴定板，如Nune62162（可自VWR購得）●2×TY/amp/glu培養基●含30％甘油的2×TY/amp/glu培養基（2×TY/amp/glu/...
方法]1．按每孔100ul蛋白抗原包被微量滴定板，4℃過夜。PBS中10ug/m1的濃度是包被抗原的標準濃度。但有時需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液（比如碳酸鹽緩沖液）。2．棄去抗原液并用PBS洗滌...
抗體基因的突變導人可以是隨機的，也可以在特異性位點上。隨機導人突變zui為簡單，而且也不需要推測哪個位點是提高親和力的*突變位點。隨機突變更接近體內的體細胞高突變過程。導人隨機突變的一種常用方法是鏈改...
[方法]1．設計合成含有CDR3隨機化序列的VLFOR引物。當然，此引物必須以擬進行親和力成熟的抗體VL基因作為基礎進行設計。本例中，VLCDR3的7個氨基酸被隨機化。在每個隨機化位點中，保留了大約5...
我們開始先用VLCDR3隨機化，是因為它一般比VHCDR3短，更重要的原因是可以在同源結構上建模。VLCDR3隨機化技術也較VHCDR3簡單一些，這是因為它位于scFv基因的3，端。因此，隨機化過程只...
免疫組織化學（1HC）或稱免疫細胞化學是一種方法學，根據特異性抗原—抗體反應的原理，檢測組織或細胞內的抗原或抗體成分。IHC有一個很長的發展歷史，已有半個世紀以上，自Coons創建免疫熒光組化技術以來...
乙醇—超聲波還原法（Baigent和Muller，1980）（1）取1％AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml雙重蒸餾水。（2）用0．2m01/LK2C03調pH至7．2，再加入lml無水乙醇。...
CAS號：95-14-7中文名稱：1,2,3-苯駢三氮唑其他中文名稱：1,2,3-苯并三唑；連三氮茚；苯并三氮雜茂；苯并三唑；防銹劑T706；防銹劑706；T406；苯三唑脂肪胺鹽；多效油性劑T406...
1）選擇適當的Pipetman：不同型號的微量移液器，各有其吸取體積范圍，請依取用溶液體積取用適當的微量移液器。P100.5~10P202~20P10020~100P20050~200P1000200...
方法步驟：1）請取六支微量離心管，分別標上A~F。2）以正確使用方法，依下表所列體積吸取不同溶液至各管中。單位ABCDEFSolution130082050180188Solution27001801...
儀器用具：37℃及65℃水浴或恒溫槽藥品試劑：質體pBluescriptIISK（-）限制酶：BamHI,PvuII及ScaI（濃?均為10units/μL,Invitrogen）10×Reactio...
儀器用具：微?離心機；冰浴藥品試劑：MPI（25mMTris-HCl,pH8.0;10mMEDTA,pH8.0;50mMglucose）MPII新鮮配制（0.2NNaOH;1%SDS;使用前以10NN...
由于RNA聚合酶一般由數個次單元組合而成，早先要在試管內應用RNA聚合酶的轉錄活性合成RNA并非易事，但這個問題在SP6,T3及T7等噬菌體的RNA聚合酶陸續被發現以后，情況已*改觀。這主要是因為這類...
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