1 簡介
噬菌體展示的出現(xiàn)，對發(fā)現(xiàn)多肽配體，以及簡化和優(yōu)化蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能十分有效。噬菌體展示篩選有兩個基本的組成部分：靶標大分子和噬菌體。噬菌體是作為一種支架來展示多肽的重組文庫的，并且可以用來釋放和擴增結(jié)合在靶標大分子上的多肽。通常，靶標大分子是蛋白質(zhì)，但也可以是核酸、糖類和磷脂，并且可以根據(jù)其純度廣泛地分為簡單的或復(fù)雜的靶標。固定在固相基質(zhì)上的純蛋白（如抗體）是一個簡單的靶標，而細胞表面則是一個復(fù)雜的靶標。
2 體內(nèi)及體外的噬菌體展示
本實驗室于1996年報道了噬菌體展示被成功用于體內(nèi)實驗，并描述了與鼠腦或腎的脈管系統(tǒng)特異性結(jié)合的幾段多肽。體內(nèi)噬菌體展示包括靜脈注射噬菌體文庫，釋放與不同器官和組織的脈管系統(tǒng)結(jié)合的噬菌體，接著擴增以及純化，然后重新注射一個噬菌體文庫，來富集能針對特異性的器官和組織的克隆。體內(nèi)篩選的一個特征就是可以同時進行正篩選和負篩選，這是由于器官和組織的脈管系統(tǒng)之間彼此存在著差異，而且在空間上也是分開的。當特異性噬菌體在靶標器官上被富集起來時，除靶標以外與器官和組織的脈管系統(tǒng)特異性結(jié)合的噬菌體被洗脫下來。
體外噬菌體展示描述的是將噬菌體溶液添加到器官和組織的原代細胞懸液中。體內(nèi)和體外噬菌體展示之間的一個顯著差異是：在體內(nèi)方法中噬菌體首先暴露于血管內(nèi)皮細胞，而在體外時則是暴露于所有類型的細胞。
zui后，我們提到了在培養(yǎng)細胞上所進行的篩選，以及在體內(nèi)噬菌體展示中大分子的粗提和純化。
我們采用體外篩選來作為預(yù)篩選及篩選的方法，但zui初的用途是測試從體內(nèi)篩選中發(fā)現(xiàn)的個別噬菌體。體外噬菌體展示是一種高通量的方法，這使得在一只小鼠上取材，來篩選許多不同的噬菌體成為可能。我們發(fā)現(xiàn)體外噬菌體展示比體內(nèi)噬菌體展示具有更低的本底，即在體內(nèi)與器官和組織脈管系統(tǒng)結(jié)合的噬菌體，在體外具有更高的親和力，換句話說就是體外的結(jié)合比體內(nèi)定位（homing）具有更高的特異性。體外具有較高的親和力是由于器官和它的脈管系統(tǒng)都表達受體，定位于肺的GFE—1多肽及其受體——膜二肽酶（membrane dipeptidase）就是一個例子L14）。然而，體外噬菌體展示也能探測與少數(shù)細胞群體結(jié)合的多肽。
3 噬菌體載體
我們所采用的載體是George Smith的源自fd-tet的fUSE5噬菌體載體和Novagen的T7Selecte載體。這兩種噬菌體的大小、形態(tài)和生長周期都有所不同。fd是一種具有溫和生長周期的絲狀噬菌體，而T7有一個二十面體衣殼，并且是一種溶解性噬菌體。具有裂解系統(tǒng)的篩選技術(shù)要更加快速，并且制備有綁定能力的載體也具有商業(yè)可行性。fUSE5以5個拷貝數(shù)（也就是多價的）展示作為融合在fd的基因Ⅲ蛋白（pⅢ蛋白）N端的融合蛋白的多肽。Novagen的T7載體展示有1～415個插入序列的拷貝，相當于作為C端與基因10蛋白融合的約1200個氨基酸。我們利用T7Select415—1b、T7Selectl0—3b和T7Selectt—1b來作為我們多肽文庫的載體，并用T7Selectl0—3b和T7Selectl—1b載體來展示更大的蛋白質(zhì)和cDNA文庫。