抗核心蛋白聚糖抗體說(shuō)明書，DCN抗體價(jià)格

對(duì)貼壁細(xì)胞：

    4.1轉(zhuǎn)染前，吸棄培養(yǎng)基，用1ml無(wú)菌siRNA轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基洗細(xì)胞一次，棄培養(yǎng)基。

4.2在洗過(guò)的細(xì)胞上，鋪稀釋的siRNA-siRNA轉(zhuǎn)染試劑混合物，37度，5-7小時(shí)

4.3孵育后，向含有轉(zhuǎn)染細(xì)胞的每個(gè)孔中加0.4ml 生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其中的血清和抗生素濃度是正常濃度的兩倍，無(wú)需去除轉(zhuǎn)染混合物。如果，毒性是個(gè)問(wèn)題的話，去除轉(zhuǎn)染混合物，以正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基代替。再孵育18-24小時(shí)

4.4孵育結(jié)束后，用新鮮正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基替換，繼續(xù)孵育24-72小時(shí)

4.5從細(xì)胞中吸棄培養(yǎng)基，用1ml 1*PBS洗細(xì)胞一次，然后丟棄

4.6放置在冰上，向孔中加入300ul 1*電泳緩沖液，用移液器吹打，混勻。（注意：混合物可能變得粘稠）

如果進(jìn)行Western blot的話，轉(zhuǎn)移混合物到15ml的錐形管中，放在冰上，對(duì)混合物進(jìn)行超聲波降解，每15秒一次，用輸出功率的40%。如果，超聲后，起很多泡泡，1000轉(zhuǎn)/秒，離心3分鐘，然后，按照western blot的方法進(jìn)行電泳，免疫印跡。

如果做轉(zhuǎn)錄分析，按照我們的半定量RT-PCR的操作進(jìn)行。

抗核心蛋白聚糖抗體說(shuō)明書，DCN抗體價(jià)格對(duì)懸浮細(xì)胞

4.1在轉(zhuǎn)染前，1000轉(zhuǎn)/秒， 離心5分鐘收集細(xì)胞。去除培養(yǎng)基，用1ml 無(wú)菌的siRNA轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基 。

4.2 再次離心1000轉(zhuǎn)/秒，5分鐘，去除培養(yǎng)基。用稀釋的siRNA-siRNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物重懸細(xì)胞。轉(zhuǎn)移細(xì)胞到12孔組織培養(yǎng)板，37°C孵育5-7小時(shí)，每次單獨(dú)轉(zhuǎn)染時(shí)重復(fù)。

4.3孵育后，加0.4ml含2倍正常血清和抗生物濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基到每個(gè)含被轉(zhuǎn)染細(xì)胞的孔中，不要去除轉(zhuǎn)染混合物。如果有毒性的話，去除轉(zhuǎn)染混合物，代替以正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基，在額外孵育18-24小時(shí)。

4.4一旦孵育結(jié)束，離心細(xì)胞，去除培養(yǎng)基。用新鮮的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。轉(zhuǎn)移細(xì)胞到12孔組織培養(yǎng)板，繼續(xù)孵育24-72小時(shí)。

如果  需要做western blot分析，則繼續(xù)以下步驟

轉(zhuǎn)移混合物到15ml的錐形管中。將2*電泳上樣緩沖液用Milli-Q超純水稀釋到1* 。1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，收集細(xì)胞，去除培養(yǎng)基，用1ml PBS洗細(xì)胞，重復(fù)一次，用300ul 1*電泳上樣緩沖液重懸細(xì)胞，放在冰上，對(duì)混合物進(jìn)行超聲波降解，每15秒一次，用輸出功率的40%。如果，超聲后，起很多泡泡，1000轉(zhuǎn)/秒，離心3分鐘，然后，按照western blot的方法進(jìn)行電泳，免疫印跡。

如果需要轉(zhuǎn)錄分析，參照半定量RT-PCR步驟。