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ELISA試劑盒實驗基礎知識認知

時間:2014-11-27閱讀:356
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在做ELISA試劑盒實驗過程中,難免會遇到各種不同的問題,比如標準曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽性,實驗的重復性不好等等。

ELISA試劑盒曲線問題:

 1.OD值不正常試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃溫度控制不好,控制正確溫度孵育時間不準確,控制孵育時間洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干陽光直射,對著風直接吹,避風避酶標儀的波長錯誤,酶標儀的波長450nm抗體的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體水質問題,用娃哈哈礦泉水代替

2.   

洗滌液配制錯誤,正確的配制洗滌液少加液體(錯加液體),正確的步驟加液體

3.  

標準品也污染,換標準品點板OD值不正常,控制溫度時間在做一次人為點板,不要點板

4.   

OD值不正常,控制溫度時間在做一次ELISA試劑盒回收率

1.空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率空白管在實驗中被污染,實驗中防止交叉污染

水質原因用,娃哈哈礦泉水代替

2.  

添加量不準確,的添加量添加濃度不適合,添加合適的濃度取液吹干量多,準確的取液吹干取到其它相層液體,取需用相吹干復溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復溶液

3.  

添加量不準確,的添加量添加濃度不適合,添加合適的濃度取液吹干量少,準確的取液吹干復溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋復溶液

假陰、陽性

1,水質原因:點復溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替

2,實驗操作原因吸取到其它相吹干,準確的取液吹干離心不*,延長離心時間

樣本的污染,更換樣本乳化未處理*,溫?。?/span>70℃)處理乳化現象

3,儀器試劑原因

離心管未清洗干凈,ELISA試劑盒正確的洗滌器具有機溶劑的影響,做試劑空白看影響結果

4,衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質),更換衍生化試劑

5,與曲線好壞相關,,保證曲線的正常

 

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