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武漢普諾賽生命科技有限公司
產品概述AnnexinV-APC染色液用于鑒定凋亡和壞死細胞
Annexin V-APC染色液用于鑒定凋亡和壞死細胞。
Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰PS有高度親和力,可通過細胞外側暴露的PS與凋亡早期細胞胞膜結合,將Annexin V標記熒光染料APC利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡。
Annexin V搭配碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或7-AAD等DNA染色液使用,可區分處于不同凋亡時期的細胞。
Annexin V搭配7-AAD檢測誘導的Jurkat細胞凋亡效果如下圖所示:
實驗操作指南步驟:
1. 細胞按照實驗方案進行凋亡誘導,300g離心5min,棄上清,收集細胞,PBS洗滌一次,輕輕重懸細胞并計數。
注:本品僅在懸浮培養的細胞中驗證,良好的細胞狀態是實驗的關鍵。貼壁生長的細胞用于凋亡檢測時,可能會因為消化、吹打等處理導致細胞的壞死或凋亡,對實驗結果可能存在不可控的影響,請謹慎處理。
2. 取1-5×10^5重懸的細胞,300g離心5min,棄上清。用PBS洗滌細胞一次,離心后棄上清,加入500μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer工作液重懸細胞。
3. 細胞懸液中加入5μL的Annexin V-APC染色液和5μL的細胞核DNA染色液。
4. 輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育15-20min。
5. 反應完成后立即上機檢測。如不能及時檢測,請于冰上避光靜置并于1小時內完成檢測。
保存條件:
4℃可保存1年;Annexin V-APC染色液需要避光保存。
注意事項:
1. 為獲得的使用效果,請在3-6個月內使用,Annexin V-APC禁止冷凍保存;
2. 染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加;
3. 熒光物質均易發生淬滅,進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,操作和存放過程盡量注意避光保存;
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
(本試劑產品僅供科學研究或進一步生產使用,不可用于臨床診斷或治療)
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