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標簽: 多道移液器 移液器 科普 億康基因
億康基因所生產的單細胞全基因組擴增試劑盒(YK001A/B )常被用于單細胞基因組PCR實驗。基因擴增實驗中,使用移液器、 多道移液器進行實驗時需要注意以下幾點:
一、充分的實驗前準備
在基因擴增實驗時,需要保證樣品區及PCR實驗室的潔凈度,以避免樣本的DNA污染,并提前預備 好實驗所需要的儀器及材料,包括 移液器、吸頭、多道移液器、PCR 管、離心管、離心管盒、PCR儀 、混勻儀、DNA清除劑、低溫冰箱等;
二、對照樣本的準備
按照實驗說明要求提前設置 5 μL 左右濃度為 30pg/ μL的基因組 DNA 作為陽性對照參考。注意稀釋DNA樣本時要使用去RNA酶的水。另外,對照品制作過程中,需要保證對照品的準確度,由于操作的體積較小,必要時可使用微量移液器進行操作。如需同時設置多個樣本,為避免重復操作過程中的也可以使用多道移液器 進行移液操作。移液之前做好校準工作,這樣可有效提高移液的準確度。
三、PCR 擴增過程
PCR擴增過程中注意將 DNA 擴增產物與預擴增樣本 分開放置;PCR以外的下游工程實驗容易造成核酸污染所以盡量不要在PCR實驗室中混用。樣本準備區、核酸提取室、PCR室、檢測區、數據分析區嚴格按規定獨立使用以避免交叉污染。對于 單細胞全基因組擴增需要保持整個擴增過程都在同一 個PCR管或孔中進行 。使用移液器吸液操作時盡量避免移液器吸頭過多接觸液體,造成樣本體積損失從而影響實驗的準確性。利用多道移液器 進行吸液時需要保證液面平齊。
實驗步驟為:細胞裂解---MALBAC 預擴增---指數式擴增---擴增產物分析----數據報告等五個階段。
總之,在單細胞全基因組擴增實驗及其它PCR實驗中,防止DNA及RNA污染是實驗成功的關鍵。實驗的每個環節中的防污染的細節我們都不可以忽略,所以,實驗前注重加強實驗操作員的操作培訓,養成嚴謹、認真的實驗態度也是很有必要的。
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