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分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀都是光檢測(cè)儀器,實(shí)驗(yàn)室中主要用來測(cè)定實(shí)驗(yàn)樣本的吸光度,雖然它們的功用基本相同,但是兩者還是有很大差別的。
其主要差異主要有以下幾點(diǎn):
一、檢測(cè)波長(zhǎng)范圍的不同
分光光度計(jì)雖與酶標(biāo)儀一樣都使用朗伯-比耳定律進(jìn)行吸光度測(cè)定,但它們的可測(cè)光在波長(zhǎng)范圍上是有所區(qū)別。分光光度計(jì)主要分為三種:
紫外分光光度計(jì):主要測(cè)定波長(zhǎng)范圍為200-380nm的紫外光區(qū).
可見光分光光度計(jì)(或比色計(jì)):主要測(cè)量波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見光區(qū)。
熒光分光光度計(jì):主要用于液體、凝膠類的光譜掃描。激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)適合用于測(cè)定2.5~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。
普通的酶標(biāo)儀主要通過濾光片來激發(fā)光源形成特定的波長(zhǎng).在濾光片輪中使用不同的濾光片可獲得不同長(zhǎng)度的波長(zhǎng),但波長(zhǎng)范圍相對(duì)較窄。另外酶標(biāo)儀具有較強(qiáng)紫外吸收能力,所以在300nm以下波長(zhǎng)光區(qū)不建議使用酶標(biāo)儀進(jìn)行含量測(cè)定。
二、檢測(cè)效率不同
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀是采用48孔或96孔酶標(biāo)板即微孔板作為樣本容器,可以盛裝不同的樣本以同時(shí)測(cè)定吸光度,并能快速地進(jìn)行吸光度對(duì)比。而分光光度計(jì)采用的是盛樣器皿為比色皿,每次只能測(cè)定一種溶液樣本,這樣增加了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性,同樣也增加了樣本及試劑的使用量,測(cè)定效率也遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于酶標(biāo)儀。
三、 光路的方向的不同
由于根據(jù)測(cè)定樣本方式的不同,兩者的光路設(shè)計(jì)也不相同。分光光度計(jì)采用的水平光路設(shè)計(jì),也就是光線水平通過樣本和比色皿,其測(cè)定結(jié)果不會(huì)受到垂直方向因素影響。酶標(biāo)儀所采用的是垂直光路設(shè)計(jì),這樣光線可以一次通過所有待測(cè)孔。但它的缺點(diǎn)在于容易受到樣本溶液液面平整度、待測(cè)樣本濃度、微孔板的通透性能等因素影響而造成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)偏差。
四、光路的長(zhǎng)度的不同:
由于樣本的吸光系數(shù)與樣本濃度、光路長(zhǎng)度及OD值成正比例關(guān)系。所以光路的長(zhǎng)度也會(huì)影響到吸光率。在分光光度計(jì)中,由于其光路是水平的,光路長(zhǎng)度近似于比色皿的寬度,一般為1厘米左右。而酶標(biāo)儀的光路長(zhǎng)度則取決于樣本溶液的液面高度,這就要保證每個(gè)孔內(nèi)的液面高度要一致,如果樣本液面的高度參差不齊,也會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度。
由此可見,吸光度的測(cè)定需要根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容去選擇對(duì)應(yīng)的儀器設(shè)備,有效地?fù)P長(zhǎng)避短,這樣才能較大程度發(fā)揮儀器的功用,從而提高實(shí)驗(yàn)效率和準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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