標簽：生物反應器，細胞培養，微載體，接種，實驗方法 

Vero細胞近年來作為新時代制藥產業的熱門細胞，成為轉基因、蛋白、抗體類制藥企業普遍使用使用的載體工具。使用細胞生物反應器進行Vero細胞的規模化增殖的接種工藝如下：

一、實驗前準備：

細胞∶Vero 細胞（ATCC級別的 ）、DMEM培養基(Hyclone)、新生牛血清、抗生素、除菌濾膜、CT-3微載體、2L實驗室生物反應器，5L搏旅細胞培養生物反應器、搖瓶、細胞培養瓶、水浴鍋。

二、接種實驗方法

1.微載體的預處理和滅菌： 接種實驗前的微載體需要用無鈣、鎂離子的PBS磷酸鹽緩沖液進行吸脹、洗滌，之后進行高壓滅菌處理，工藝控制參數為：吸脹質量濃度不超過50 g·L-1，滅菌溫度121 ℃，20 min。

2.轉瓶接種操作：

將培養瓶內的 Vero 細胞接種于500ML的轉瓶內，CT-3 微載體濃度為 3g/L，并加入適量的混合牛血清的DMEM培養基，此時接種密度以2.0×10°cells/mL為宜。

在微載體細胞生長過程中，可適當補加微載體 2g/L，使微載體濃度達到 5g/L即可接種在5L細胞培養生物反應器中作為種子細胞進行培養。

3.規模擴培接種操作

（4）當細胞生長到達密度時，將細胞及新的微載體一起轉入大容積的微載體培養養反應器中，進行細胞培養。此過程的工藝參數為：溫控： 37士0.1℃，溶解氧為 50%空氣飽和度，攪拌器的轉速維持在20～32 r/min即可。當細胞密度達 1.1×10'cells/mL時，即可進入下游環節進行產品生產。

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