Amplite 熒光素酶報告基因檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于熒光素酶報告基因檢測的試劑盒。β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和熒光素酶是常見的報告基因。好的多功能常見報告基因是來自于北美的螢火蟲Photinus pyralis的熒光素酶。此酶蛋白的活性不需要進行蛋白質翻譯后修飾獲得。它在活細胞中高濃度積累不會造成細胞毒性，可以在原核和真核細胞中使用。在ATP、鎂離子和氧存在的條件下，螢火蟲熒光素酶催化熒光素氧化形成生物熒光。檢測試劑盒利用與熒光強度相關的公式來定量檢測活細胞和細胞抽提物中的熒光素酶。在熒光素酶的催化下，我們的試劑/試劑盒會產生具有強烈熒光的熒光產物。本試劑盒提供所有的必需組分，并且經過優化處理，我們還提供可以用于HTS（高通量篩選）實驗方案。本試劑盒具有非常好的靈敏度，可以用于對靈敏度有要求的分析。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Amplite 熒光素酶報告基因檢測試劑盒。 

適用儀器

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備細胞（樣品）（96孔板是100 µL /孔，384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的螢光素酶工作溶液
3.在室溫下孵育10-20分鐘
4.檢測560 nm處的熒光強度

溶液制備 

1.工作溶液配制

將全部反應緩沖液（組分B）轉移到熒光素酶（組分A）的瓶中，并充分混合以制成熒光素酶工作溶液。 

樣品操作及分析

1.進行熒光素酶檢測：

1.1通過在所需化合物緩沖液中加入10 µL 10X測試化合物（96孔板）或5 µL 5X測試化合物（384孔板）來用檢測化合物處理細胞（或樣品）。 對于空白孔（沒有細胞的培養基），添加相應量的化合物緩沖液。

1.2將細胞板在5％CO2培養箱中于37°C孵育一段時間（通常為4小時至過夜）。

1.3每孔熒光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4避光在室溫下孵育平板10-20分鐘。

1.5用酶標儀檢測熒光強度。

2.建立標準的螢光素酶校準曲線：注意：如果需要計算樣品中螢光素酶的量，則應與上述測定法一起生成螢光素酶標準曲線。

2.1使用不含螢光素酶的樣品（作為對照）來檢測背景發光，在含0.1％BSA的PBS緩沖液中進行一系列螢光素酶稀釋液。 注意：通常螢光素酶的濃度從1 pg / mL到1 ng / mL是合適的。

2.2將100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀釋的熒光素酶溶液添加到一個空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的熒光素酶工作溶液。

2.4在避光的條件下，將反應混合物在室溫下孵育10-20分鐘。

2.5用標準酶標儀記錄熒光強度。

2.6生成熒光素酶標準曲線。