樣本實驗方案

概述

1.準備一氧化氮工作溶液（50 µL）
2.加入一氧化氮標準液或測試樣品（50 µL）
3.在室溫下孵育30-60分鐘
4.監控熒光強度

溶液配制

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環。
1.1 DAW-J2儲備溶液（200X）：
將25 mL DMSO加入小瓶DAW-J2（組分A）中，制成200X儲備溶液。

1.2 一氧化氮標準溶液（100 mM，未提供）：
我們使用DEA NONOate（Cayman Chemical，貨號82100，CAS＃372965-00-9）作為一氧化氮標準。 一氧化氮的標準溶液在0.01N NaOH中的濃度為100 mM。

2.標準溶液

一氧化氮標準
將10 µL 100 mM NONOate標準溶液添加到990 uL分析緩沖液（組分B）中，以生成1 mM一氧化氮標準溶液（SD7）。然后進行1：2系列稀釋，以得到系列稀釋的一氧化氮標準液（SD6-SD1）。注意：稀釋的NONOate標準溶液不穩定，應立即使用。

3.工作溶液

將25 µL DAW-J2 200X儲備溶液加入5 mL的測定緩沖液（組分B）中并充分混合。 注意：此一氧化氮工作溶液足以進行100次測定。工作溶液不穩定，請及時使用，并避免直接暴露在光線下。

樣品操作及實驗分析

表1：黑色96孔微孔板中一氧化氮標準品和測試樣品的布局。 SD =標準，BL =空白對照，TS =測試樣品

表2：每個孔的試劑組成

1.根據表1和表2提供的布局，將一氧化氮標準液（SD），空白對照（BL）和測試樣品（TS）制成黑色96孔微孔板。對于384孔板，請使用25 µL 每孔試劑，而不是每孔50 µL。

2.將50 µL一氧化氮工作溶液添加至標準液，空白對照和測試樣品的每個孔中，以使一氧化氮總測定體積為100 µL /孔。 對于384孔板，請在每個孔中使用25 µL工作溶液，總體積為50 µL /孔。

3.避光保存，室溫下孵育反應30分鐘至1小時。

4.使用熒光酶標儀在激發= 570 nm，發射= 610 nm（截止= 590 nm）下監控熒光的增加。