操作說(shuō)明

注意：以下是我們推薦的方案。該方案僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。

1.將1克Pluronic F-127溶于10毫升蒸餾水中，制成10％（w / v）原液，或2克Pluronic F-127在10毫升無(wú)水二甲基亞砜（DMSO）中制成20％（w / v）儲(chǔ)備溶液。這些可能需要在40至50℃的溫度下加熱約30分鐘。在室溫下儲(chǔ)存溶液。

注意：不要冷卻或冷凍Pluronic F-127溶液，因?yàn)樗赡軙?huì)沉淀。如果觀察到沉淀，可以通過(guò)加熱至37℃使沉淀物溶解并在使用前渦旋。

2.將10％或20％Pluronic®F-127儲(chǔ)備液（來(lái)自步驟1）稀釋到細(xì)胞上樣緩沖液中，如Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS），稀釋度為1：1000至1：500，以達(dá)到0.02至0.04％的工作溶液。

3.然后將AM酯的DMSO儲(chǔ)備溶液稀釋到0.02至0.04％的工作溶液（來(lái)自步驟2）中，以獲得1μM至10μM的最終AM酯濃度。

注意：Pluronic F-127的最終濃度通常保持在0.08％或以下。

4.將細(xì)胞在所需溫度下孵育10分鐘至1小時(shí)。

注意：通常，希望使用所需的最少量的AM酯來(lái)獲得足夠的熒光信號(hào)噪聲水平。

5.標(biāo)記后，在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前用HHBS或新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞。