豬瘟病毒IgG抗體檢測(cè)ELISA試劑盒

                                                （酶聯(lián)免疫法）

使用說(shuō)明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名：豬瘟病毒IgG抗體檢測(cè)ELISA試劑盒

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Classical Swine fever virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒用于檢測(cè)豬血清中豬瘟病毒IgG抗體，評(píng)估豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫狀況。

【原    理】

本試劑盒系由預(yù)包被豬瘟病毒E2重組蛋白的微孔板和酶標(biāo)記二抗及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)豬血清或血漿中豬瘟病毒特異性抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在包被板中加入對(duì)照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有豬瘟病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。

【試劑盒組成】

【樣品制備】  取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品短期可于2～8℃保存，

             長(zhǎng)期需置-20℃保存。

【樣品稀釋】  用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)

             照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作

             20倍稀釋。
【試驗(yàn)操作方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量包被微孔板條，設(shè)空白、陰性及陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl；空白對(duì)

 照孔不加。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A）。

【結(jié)果判定】

   定義：N=陰性對(duì)照孔平均A值；P=陽(yáng)性對(duì)照孔平均A值；S=樣品孔A值；S/P=樣品孔A值/陽(yáng)性對(duì)照孔平均A值。

1.正常情況下P/N≥2.1即試驗(yàn)成立；否則不成立。

2.S/P≥0.4時(shí)判為陽(yáng)性，S/P＜0.3時(shí)判為陰性，0.3≤S/P＜0.4時(shí)判為可疑。

當(dāng)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。

【試驗(yàn)方法的局限性】

   該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬瘟病毒IgG抗體。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板

 開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，使用期限為1個(gè)月)

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。

【儲(chǔ)  存】

原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】

有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。