傅經理
PASM 六胺銀染色
實驗收費標準:
項目編號 | 項目名稱 | 單價 | 備注 |
ZC1063 | PASM 六胺銀染色 | 張 | 55元 |
實驗流程:
1、石蠟切片脫蠟至水。
2、重鉻酸鉀溶液浸泡過夜(需用重鉻酸鉀溶液浸泡過夜否則細胞核極易著黑色影響觀察)。
3、水洗2min
4、1%的高碘酸氧化15~20min(此時配制工作液,并將工作液放置56℃烤箱預熱)
5、流水沖洗5min,再用蒸餾水洗2次
6、切片用阻水筆畫圈,滴加預熱的工作液,放入濕盒中加蓋(濕盒中要加入少量水,防止染液在長時間加熱時蒸發變干)
7、40分鐘后要將切片拿出在鏡下觀察(觀察時工作液不用洗去)腎臟則以腎小球毛細血管基膜出現黑色為準,如果著色不夠深,則繼續放入烤箱孵育;肺則以真菌變為黑色為準(有的肺組織無真菌,則以同組有真菌的肺做參考,如果都沒有真菌則以支氣管變黑為標準)。以后每隔10分鐘取出切片在鏡下觀察,直至染色結果滿意為止。
8、蒸餾水稍洗
9、5%的處理5min
10、伊紅復染(在HE染色中的伊紅后面脫水的第一缸中染伊紅為佳,伊紅復染不用染太深)直接在伊紅后面的酒精脫水,透明,封片。
結果判讀:
腎小球囊基膜、腎毛細血管球基膜和腎小管上皮基膜呈黑色。真菌、彈性纖維和網狀纖維也呈灰黑色或棕黑色。
注意事項:
1、六銨銀儲備液配妥后應置于4℃的冰箱內,一般可以保存6個月,如果室溫僅可保存2周。六銨銀工作液僅能使用一次;
2、腎基膜比真菌等較難顯色,因而在60℃溫箱中作用的時間也較長;腎小管基膜一般比腎毛細血管球基膜顯色早,但應以后者作為標準,腎毛細血管球基膜呈黑色而背景呈淡棕黃色為宜;
3、在低倍鏡檢時,菌體不宜著色太黑,否則在高倍鏡下觀察則不夠清皙透亮,在菌體密集成堆的地方顯色更要適當;
4、切片入六胺銀染色之前必須用蒸餾水浸泡洗滌,不能用自來水,否則易出現沉淀。染色好用滴染法好控制染色并且要求較低,如果用浸染法所有與試劑接觸的玻璃缸必須用蒸餾水清洗干凈。另外浸染法需要的試劑較多而且玻片在顯影液中及易出現銀鏡反應使整個玻片變黑很臟影響美觀并且不易控制顯色。