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貨號 | XG-P2762 | 規格 | 5ml |
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包裝 | 盒裝 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
磁珠
貨號 | 規格 | 分類 |
XG-P2762 | 5ml | 核酸純化 |
保存條件:室溫,室溫較高時(夏季)可酌情冷藏,禁止冷凍??杀4?18 個月。
產品介紹:
磁珠法核酸純化技術采用了納米級磁珠微珠,這種磁珠微珠的表面標記了一種官能團,能同核酸發生吸附反應。 使
用磁珠法來純化核酸的就是自動化,磁珠在磁場條件下可以發生聚集或分散,從而可擺脫離心等所需的
手工操作流程。
本品主要用來提核酸(DNA/RNA)提取,產物純化等實驗,配合磁力架或核酸自動提取儀(磁珠法)使用。
產品參數:
使用說明:
1. 如有冷藏情況,使用前務必室溫平衡;
2. 本產品使用前需混合均勻,倒置后瓶底應無明顯沉淀;
3. 每個反應的磁珠用量為 10-50 μl(根據實驗要求或具體說明書調整用量);
4. 根據樣本的不同,本產品在吸附核酸時,會有結團現象。請在吸附、洗滌和洗脫的步驟,充分震蕩混勻,使其充
分懸浮;尤其是洗脫步驟,一定要將結團打散(可渦旋震蕩或吹吸),否則影響洗脫效率;
5. 上機自動化操作時,磁吸時間建議不低于 30 秒。(推薦使用BMT-96E全自動核酸提取儀/BMT-32E全自動核酸提取
儀。)
一、模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成 等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;
四、Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;
五、PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;
六、酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。
七、MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。
八、DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
①Oligo dT
選擇Oligo dT時,要求RNA必須有Poly A,所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT,對RNA樣品的質量要求較高,不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應,建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT,尤其適合模板豐度很低的情況(比如某個gene表達量很低)。選擇隨機引物時,鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板,然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系,一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng,如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng,可能會導致小片段產物(<500bp)的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物(GSP)是某個基因序列的一部分,與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合,每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此,當分析多種目標時,則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同,所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物,建議對退火溫度進行優化。
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