PLANTaid 植物 RNA 助提劑

保存條件：常溫運(yùn)輸，室溫或者 4℃可保存 6 個(gè)月。

產(chǎn)品介紹：

植物助提劑 PLANTaid 是針對(duì)植物 RNA 提取時(shí)，針對(duì)富含多糖多酚等不容易清除的特點(diǎn)設(shè)計(jì)的一種多糖多酚植物 RNA 提取的輔助劑，主要成份為聚乙烯吡咯烷酮等高分子化合物。它們可以和多糖多酚等雜質(zhì)結(jié)合，通過(guò)離心去除。它和絕大多數(shù)常用的使用高離序鹽（chaotropic salts ）如異硫氰酸胍的 RNA 提取方法兼容。使用方法簡(jiǎn)便，只要在正常的 RNA 提取步驟中加一步驟即可。將 PLANTaid 加入裂解液后，研磨，勻漿，PLANTaid 和多糖多酚等雜質(zhì)結(jié)合，離心將 PLANTaid，多糖多酚和任何不溶解的雜質(zhì)去除,取上清就可以繼續(xù)后面的正常RNA 提取步驟。

注意事項(xiàng)：

1.PLANTaid使用過(guò)量可能降低RNA產(chǎn)量，由于不同植物中所含多糖，多酚量變異性很大，因此用量應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)中適當(dāng)調(diào)整。

2.如果處理的植物量特別少，按照下面比例計(jì)算所需裂解液＋PLANTaid 總體積少于200μl的情況下應(yīng)該使用不少于200μl的總體積

來(lái)提取植物RNA，具體為175μl裂解液＋25μl PLANTaid= 200μl。

使用方法：

1.估計(jì)待處理植物體積的方法，我們按照100mg/100μl的比例來(lái)估計(jì)待處理植物體積。

2.查看使用的RNA提取手冊(cè)（方法）的裂解液和植物處理量之間的比例

如果裂解液：植物處理量（體積比）≤9:1,則在所需裂解液中加入九分之一裂解液體積的PLANTaid;

如果裂解液：植物處理量（體積比）>9:1,則在所需裂解液中加入和植物處理量等體積的PLANTaid。

3.舉例說(shuō)明：

1）如果RNA提取手冊(cè)上面裂解液：植物處理量=5:1,植物處理量為100mg(我們認(rèn)為體積為100μl)，所需裂解液為100μl×5= 500μl，

再加入500μl×1/9＝55.6μl的PLANTaid. 2）如果RNA提取手冊(cè)上面裂解液：植物處理量=10:1, 植物處理量為100mg(我們認(rèn)為體積為100μl)，所需裂解液為100μl×10 = 1000μl，再加入100μl即和植物處理量等體積的PLANTaid。

3）使用上面的混和液按照正常操作步驟研磨，勻漿處理后，將裂解物用速（12000-14000rpm）室溫下離心5 sec。不溶的細(xì)胞碎片，PLANTaid和它結(jié)合的多糖多酚等雜質(zhì)可以通過(guò)此離心步驟去除。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過(guò)程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過(guò)程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過(guò)250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。