TRIzol LS Reagent

是一種專門用于從液體樣本（如細菌、病毒、酵母、細胞、血液、組織懸液）中提取高質量 RNA 的試劑。與 TRIzol Reagent 相比，區別在于其組分濃度，是一種用于提取液體樣本RNA 的濃縮試劑，故提取相同量樣本所需的用量相對較少。樣品在 中能夠充分被裂解，在樣品勻漿或裂解過程中，它可保持 RNA 的完整性，同時裂解細胞，溶解細胞內含物，提取過程方便快速，整個操作在一小時內便可以完成。應用  獲得的總 RNA 蛋白質和 DNA 污染極少，可用于 Northern Blot、反轉錄、ployA篩選、RNase 保護分析和基因克隆等后續分析。注意：(1)請勿應用該試劑直接處理大塊固體組織，否則會影響 RNA 的產量。(2)該試劑含有強變性劑，請勿直接于皮膚接觸或吞咽，若接觸到皮膚或眼睛請盡快到醫院處理。實驗時務必穿實驗服，戴手套。
儲存：2-8℃避光保存，可保存 2 年。
自備試劑：氯仿，異丙醇，70％乙醇（DEPC 水配置），RnaseFree H2O。
實驗前準備：
RNA 制備的關鍵是要抑制細胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及試劑中的 RNA 分解酶的污染。因此，在實驗中必須采取以下措施：戴一次性干凈手套；使用 RNA 操作專用實驗臺；在操作過程中避免講話等等。通過以上辦法可以防止實驗者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。
注意事項：
1. 盡量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，應在使用前用0.1%DEPC 水溶液在 37℃處理 12h，然后在 120℃高壓滅菌 30min 以除去殘留的 DEPC。
2. 用于 RNA 實驗的試劑，須使用干熱滅菌（180℃，60min）或DEPC水處理相關容器，使用的無菌水須用0.1%的DEPC處理后再進行高溫高壓滅菌。
3. RNA 實驗用的試劑和無菌水都應專用，避免混用后交叉污染。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產物（＜500bp）的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優化。