Strep-Tactin XT Resin

Strep-Tactin XT（Strep-Tactin 的升級產品）瓊脂糖凝膠 FF 是一種將 Strep-Tactin XT 共價交聯在瓊脂糖凝膠微球上，形成的生物親和層析分離介質。該純化介質主要用于純化 Strep tag II 或 Twin strep tag 標簽蛋白。Strep tagII 標簽為 8 個氨基酸的小標簽（WSHPQFEK），由于標簽小，僅為 1kDa 左右，一般不影響融合后蛋白質的結構和功能，常用于融合表達蛋白質的檢測和純化。由于 Strep-Tacin XT 對 Strep tag II 標簽具有高度特異性，一步純化就能獲得高純度的蛋白質樣品。Strep tag II 標簽蛋白與凝膠結合后可使用脫硫生物su競爭方式進行洗脫，該洗脫方式比較溫和，對蛋白影響極小。由于 Strep-Tactin 對 Strep tag II 標簽具有很強的吸附能力，在生物su的洗脫過程中不易洗脫，造成洗脫效率較低。可以通過在脫硫生物su洗脫液中添加 25mM NaOH 來提高蛋白回收效率，而添加 NaOH 后會造成 Strep-Tactin從填料上脫落，進而污染純化蛋白。本產品為升級的 Strep-Tactin XT，其可耐受高濃度的 NaOH 洗脫（0.5M），除此外 Strep-Tactin XT 可耐受 1%SDS、6M 尿素，因此使用該填料可以在變性條件下純化標簽蛋白。
儲存：4~8℃可保存 2 年。
保存液：10mM Tris-HCl，pH7.5；100mM NaCl；20%乙醇
實驗用溶液：
(1) 結合緩沖液：根據自身蛋白性質來定，一般推薦 50mM Tris-HCl(pH8.0), 150mM NaCl（或采用 PBS）
(2) 洗滌液與結合緩沖液相同，一般洗滌 5~20 個柱體積。
(3) 洗脫緩沖液：在結合緩沖液中加入 2.5~3.5mM D-Biotin。或根據蛋白性質和用途靈活使用其它洗脫條件，如 2.5mMD-Biotin+10mM NaOH；25~50mM NaOH；0.2% SDS：
(4) 柱再生：0.2M NaOH 洗滌 3~5 個柱體積；1M NaCl 洗滌 3~5 個柱體積；PBS 平衡 3~5 個柱體積。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產物（＜500bp）的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優化。