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人直腸組織提取物【Rectum: Normal Human Rectum Derivatives】
直腸并不直,在矢狀面上有骶曲和會陰曲兩個彎曲,骶曲是直腸上段在骶、尾骨前面下降,形成凸向后的彎曲;會陰曲是直腸尾端繞過尾骨尖,形成凸向前的彎曲。公司科技提供來自新鮮或冷凍人直腸組織中高質量的總RNA,PCR準備的一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院,采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人直腸組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 人直腸組織提取物 |
規格 | 詳見說明書 |
貨號 | XG-X6937 |
操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
MANNAN醛 標準品anti- Lin28A-specific antibody通用轉錄因子ⅡF肽1(GTF2F1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Glycopyrrolate醛 標準品anti- LIN28B antibodyTATA框結合蛋白關聯因子2(TAF2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Glycoluril醛 標準品anti- Lin28B-specific antibody卵黃高蛋白(PV)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
MONOMYRISTIN醛標準溶液 標準品anti- LIN41 antibody免疫球蛋白G2(IgG2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
POLY(PROPYLENE GLYCOL)醛標準溶液 標準品anti- LIN7A antibody細胞因子信號轉導抑制因子3(SOCS3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Glycerol tributyrate;Butyrin;Tributyrin;Glyceryl tributyrate;醛標準溶液 標準品anti- LIN7B antibody整合素αM(ITGαM)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Glycerol formal百蟲 標準品anti- LIN7C antibody整合素αM(ITGαM)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
HEPARINASE百蟲 標準品anti- LIN9 antibodyB-細胞激活因子(BAFF)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
人直腸組織提取物Aspergillus nidulans (Eidam) Winter, anamor ..蛋白激酶C亞性D型抗體Human SST(Somatostatin) ELISA Kit內向整流型鉀離子通道亞家族J成員5(KCNJ5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Flexibacter flexilis Soriano酸化絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體Human FBN1(Fibrillin-1) ELISA Kit蛋白信號調節因子6(RGS6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..微管相關蛋白4抗體Human GZMA(Granzyme A) ELISA Kit無翅型MMTV整合位點家族成員10B(WNT10B)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Homo sapiens, human肥大細胞蛋白酶7抗體Human NGB(Neuroglobin) ELISA Kit成纖維細胞生長因子8(FGF8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..硝唑單克隆抗體Human IMPA2(Inositol monophosphatase 2) ELISA Kit阿米洛利敏感鈉離子通道蛋白1γ(SCNN1γ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Oudemansiella mucida (Schrader : Fries) Hoe ..環指蛋白59抗體Human ITGA2B(Integrin alpha-IIb) ELISA Kit阿米洛利敏感鈉離子通道蛋白1β(SCNN1β)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..肌收縮蛋白MYOT抗體Human CPB2(Carboxypeptidase B2) ELISA Kit動力蛋白軸絲重鏈11(DNAH11)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Penicillium chrysogenum Thom, anamorph致癌基因n-Myc抗體Human ADAM8(Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 8) ELISA Kit解整合素金屬蛋白酶17(ADAM17)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
培養步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
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