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當前位置:上海西格生物科技有限公司>>細胞培養(yǎng)>>細胞、組織提取物>> 大鼠嗅鞘組織提取物
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所 在 地上海市
更新時間:2020-10-26 20:51:57瀏覽次數(shù):565次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠嗅鞘組織提取物 | 詳見說明書 | XG-X7099 |
大鼠嗅鞘組織提取物【Brain: Normal Rat Olfactory Bulb Ensheathing Derivatives】
嗅鞘組織在嗅味的辨別中具有重要功能。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠嗅鞘組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠嗅鞘組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
Human NCAD (Neural Cadherin) ELISA Kit7號染色體開放閱讀框42抗體anti- OTP1 antibody甘露聚糖結合凝集素關聯(lián)蛋白酶1(MASP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human PICP (Procollagen I C-terminal Propeptide) ELISA Kit 7號染色體開放閱讀框44抗體anti- OTOP3 antibody甘露聚糖結合凝集素關聯(lián)蛋白酶1(MASP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human PDGFRL (Platelet Derived Growth Factor Receptor Like Protein) ELISA Kit 8號染色體開放閱讀框40抗體anti- OTUD4 antibody上皮型脂肪酸結合蛋白(FABP5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human LUM (Lumican) ELISA Kit8號染色體開放閱讀框42抗體anti- OTUD6A antibody凋亡相關因子配體(FASL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human PRR4 (Proline Rich Protein 4, Lacrimal) ELISA Kit8號染色體開放閱讀框44抗體anti- OTUD6B antibody血紅素結合蛋白(HPX)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human PSAP (Prosaposin) ELISA Kit 9號染色體開放閱讀框3抗體anti- OTUD7B antibody蛋白激酶N2(PKN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human PTGES (Prostaglandin E Synthase, Microsomal) ELISA Kit 8號染色體開放閱讀框47抗體anti- OTX2 antibody蛋白激酶N2(PKN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human ISG15 (Interferon Stimulated Gene 15) ELISA Kit8號染色體開放閱讀框48抗體anti- OTX2 antibody蛋白激酶N2(PKN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
大鼠嗅鞘組織提取物Lentivirus GRE luciferase reporter 慢病報告基因顆粒 酸醇胺轉移酶A抗體Human SSTR2(Somatostatin receptor type 2) ELISA Kit神經(jīng)元凋亡抑制蛋白試劑盒
Lentivirus GLI luciferase reporter 慢病報告基因顆粒 前列環(huán)素受體抗體Human AMOT(Angiomotin) ELISA Kit神經(jīng)營養(yǎng)因子3試劑盒
Lentivirus GATA luciferase reporter 慢病報告基因顆粒 酸蛋白聚糖PTPRZ抗體Human AMOTL1(Angiomotin-like protein 1) ELISA Kit神經(jīng)型一氮合成酶試劑盒
Lentivirus GAS luciferase reporter 慢病報告基因顆粒 神經(jīng)特異蛋白酸酶N5抗體Human PMEL(Melanocyte protein PMEL) ELISA Kit神經(jīng)細胞粘著分子試劑盒
Lentivirus GAL4 luciferase reporter 慢病報告基因顆粒 足細胞表達蛋白/轉錄因子21抗體Human ITGB2(Integrin beta-2) ELISA Kit神經(jīng)細胞粘附分子配體1試劑盒
Lentivirus FOXO luciferase reporter 慢病報告基因顆粒 孕激素受體抗體Human CD68(Macrosialin) ELISA Kit神經(jīng)特異性烯醇化酶試劑盒
Lentivirus ER luciferase reporter 慢病報告基因顆粒 類固醇受體 神經(jīng)細胞突觸蛋白PCLO抗體Human KRT16(KeRatin, type I cytoskeletal 16) ELISA Kit神經(jīng)肽Nesfatin-1 elisa試劑盒
Lentivirus ERSE luciferase reporter 慢病報告基因顆粒 11號染色體開放閱讀框73抗體Human S100A11(Protein S100-A11) ELISA Kit神經(jīng)絲蛋白M試劑盒
收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
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