人胃癌組織提取物【Cancer: Human Stomach Cancer Derivatives】
胃癌是消化道中常見的惡性腫瘤，按組織結構的不同可以分為粘液癌、腺癌、未分化癌和特殊類型癌四種。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體人胃癌組織中高質量的總RNA，PCR準備的一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人胃癌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

HIPPURYL-HIS-LEU酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體anti- MARVELD3 antibodyAMP激活蛋白激酶β1(PRKAβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

EQUILINATP5E蛋白抗體anti- MAS1L antibody白介素6受體(IL6R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

MALTOTRIOSE HYDRATE 95ATP5G2蛋白抗體anti- MAS1L-Specific antibody酮酸脫酶激酶同工酶4(PDK4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

(-)-Gallocatechin gallateATP6V0D2蛋白抗體anti- MASP1 antibody酮酸脫酶激酶同工酶4(PDK4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

JP-TS AVIATION FUELATP6V1B2蛋白抗體anti- Maspin antibody胞漿型脂酶A2(cPLA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

LYTICASEATPIF1蛋白抗體anti- Mast Cell Chymase antibodyⅡD組脂酶A2(PLA2G2D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

K-CATALYSTAttractin蛋白抗體anti- MAST1 antibody三葉因子3(TFF3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Imiquimod酸化有絲分裂激酶B抗體anti- MAST3 antibody防御素β1(DEFβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

人胃癌組織提取物Clavibacter michiganensis subsp.sepedonic ..間皮素抗體Human LRP11(Low-density lipoprotein receptor-related protein 11) ELISA Kit含纈酪肽蛋白(VCP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..基質金屬蛋白酶-1抗體Human RIPK1(Receptor interacting serine/threonine kinase 1) ELISA Kit神經介素U(NMU)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

frozen基質金屬蛋白酶13抗體Human KIAA1377(Uncharacterized protein KIAA1377) ELISA Kit信號傳導轉錄激活因子6(STAT6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Kluyveromyces lactis (Dombrowski) van der W ..基質金屬蛋白酶-14抗體Human PDIA4(Protein disulfide-isomerase A4) ELISA Kit阿黑皮素原(POMC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Burkholderia vietnamiensis Gillis et al.基質金屬蛋白酶3抗體Human DPP7(Dipeptidyl peptidase 2) ELISA Kit腦啡肽酶(NEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..基質金屬蛋白酶-7抗體Human TPSG1(Tryptase gamma) ELISA Kit利鈉肽受體1(NPR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..基質金屬蛋白酶-9抗體Human PDK1([Pyruvate dehydrogenase [lipoamide]] kinase isozyme 1, mitochondrial) ELISA Kit利鈉肽受體2(NPR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Helicobacter muridarum Lee et al.髓鞘少樹突膠質細胞糖蛋白抗體Human KPRP(KeRatinocyte proline-rich protein) ELISA Kit利鈉肽受體3(NPR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。