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人腎足突基底膜組織提取物

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時間:2020-10-25 17:29:59瀏覽次數(shù):199次

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收到細胞如何處理?

1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

 產(chǎn)品名稱

 規(guī)格

 貨號

 人腎足突基底膜組織提取物

 詳見說明書

XG-X6957

人腎足突基底膜組織提取物【Human kidney: Normal kidney Foot Processes Basement MembraneDerivatives】
腎小囊臟層是腎小管起始部膨大凹陷而成的杯狀雙層囊,分壁層和臟層。公司科技提供來自新鮮或冷凍人腎足突基底膜組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準備的一條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人腎足突基底膜組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜。

 

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

RhodiuM;酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質(zhì)/α-晶體蛋白b鏈抗體anti- MAGEB1 antibody核因子κB(NFκB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

AG 490肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體anti- MAGEB18 antibody核因子κB2(NFκB2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

TYROSINASE三酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員2抗體anti- MAGEB4 antibodyV-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病癌基因同源物B(RELB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Celastrol毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗體anti- MAGEC2 antibody軸突生長誘向因子1(Ntn1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Rapamycin氨肽酶A抗體anti- MAGEC3 antibody軸突生長誘向因子4(Ntn4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

GELLAN GUMATP結合蛋白家族7抗體anti- MAGED1 antibody載脂蛋白A4(APOA4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

LITHIUM-6ASCL2蛋白抗體anti- MAGED1 antibodyE選擇素(SELE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Rifampicin肌動蛋白相關蛋白M1抗體anti- MAGED2 antibody解整合素金屬蛋白酶9(ADAM9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

人腎足突基底膜組織提取物Arcobacter skirrowii Vandamme et al.膜蛋白MLC1抗體Human PLAC8(Placenta-specific gene 8 protein) ELISA Kit腫瘤壞死因子受體超家族成員4(TNFRSF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Verticillium dahliae KlebahnMHC I類鏈相關蛋白A/組織相容性復合物MHCIa抗體Human RNASE7(Ribonuclease 7) ELISA Kit脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Candida zeylanoides (Castellani) Langeron e ..代謝型受體1A抗體Human PLEK(Pleckstrin) ELISA Kit成纖維細胞生長因子8(FGF8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Eupenicillium hirayamae Scott et Stolk, tel ..促代謝型受體2+3抗體Human IL-37(Interleukin-37) ELISA Kit白介素18結合蛋白(IL18BP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Ophiostoma seticolle (Davidson) de Hoog et ..促代謝型受體1+5抗體Human LDLR(Low-density lipoprotein receptor) ELISA Kit紅細胞衍生核因子2樣蛋白2(NFE2L2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..膜蛋白相互作用蛋白RGS16抗體Human VLDLR(Very low-density lipoprotein receptor) ELISA Kit糖皮質(zhì)激素誘導腫瘤壞死因子受體(GITR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

freeze-dried肌球蛋白7a/常染色體隱性耳聾蛋白2抗體Human KRT6A(KeRatin, type II cytoskeletal 6A) ELISA Kit端粒重復結合因子2相互作用蛋白(TERF2IP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Serratia marcescens Bizio巨噬細胞甘露糖受體2抗體Human LRP6(Low-density lipoprotein receptor-related protein 6) ELISA Kit類固醇5α還原酶2(SRD5α2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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