收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續服務依據）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

人椎間盤髓核組織提取物【Intervertebral Disc: Normal Human Intervertebral disc nucleus pulposus Derivatives】
椎間盤是位于人體脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環、髓核組成的一個密封體。公司科技提供來自新鮮或冷凍人椎間盤髓核組織中高質量的總RNA，PCR準備的一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院，采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人椎間盤髓核組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞培養步驟：

一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

Sulfathiazole sodium2-溴酸 標準品anti- LRAT antibody己糖激酶3(HK3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

SULFANITRAN敵草快 標準品anti- LRCH1 antibody色氨酰tRNA合成酶(WARS)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Sulfisoxazole基死蜱 標準品anti- LRCH2 antibody二嘧啶酶樣蛋白3(DPYSL3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

SULFORHODAMINE B草甘 標準品anti- LRCH3 antibody腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

REACTIVE ORANGE 16草甘 標準品anti- LRDD antibody接觸蛋白4(CNTN4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

CHOLERA TOXIN B SUBUNITMonomethyl Tetrachloroterephthalic Aanti- LRG1 antibodyⅠ類主要組織相容性復合體E(MHCE)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

5'-INOSINIC ACID DISODIUM SALT HYDRATEMonomethyl Tetrachloroterephthalic Aanti- LRIG1 antibody受體相互作用蛋白1(GRIP1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

MYOGLOBIN FROM HORSE SKELETAL MUSCLE*四氯對苯二酸 標準品anti- LRMP antibody干擾素調節因子4(IRF4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

人椎間盤髓核組織提取物human (B cell); human (myeloma)組織相容性復合體β抗體Human TLR4(Toll-like receptor 4) ELISA Kit血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Myc基因肺癌相關蛋白抗體Human MYH2(Myosin-2) ELISA Kit血紅蛋白(HB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human結腸癌相關蛋白MIC1抗體Human MUC5AC(Mucin-5AC) ELISA Kit性酸酶(ALP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..基二酸尿癥cblA抗體Human XDH(Xanthine dehydrogenase/oxidase) ELISA Kit轉鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..DNA修復基磺酸敏感性基因19抗體Human FOXO3(Forkhead box protein O3) ELISA Kit轉鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Kluyveromyces lactis (Dombrowski) van der W ..非平滑肌肌球蛋白2A抗體Human MZB1(Marginal zone B- and B1-cell-specific protein) ELISA Kit肌漿球蛋白(Myo)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Penicillium janthinellum Biourge, anamorph19號染色體開放閱讀框28抗體Human FOXO1(Forkhead box protein O1) ELISA Kit層粘連蛋白(LN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..T淋巴細胞成熟相關蛋白抗體Human ADAM10(Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10) ELISA Kit碳酸酐酶Ⅱ(CA2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

公司產品采用干冰運輸，經過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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