一、細胞基本屬性

細胞別稱： COLO-320DM; COLO_320DM; COLO-320-DM; COLO320/DM; COLO320-DM; COLO320DM; Colo320DM; COLO320 DM; COLO 320 DM；人結直腸腺癌細胞

種屬來源： 人

年齡性別： 女；55歲

組織來源： 器官：結腸；腫瘤分期：Dukes氏Ｃ型；疾?。航Y直腸腺癌

生長特性： 半貼壁半懸浮生長

細胞形態： 圓形的并能折光的

背景簡介： COLO 320DM細胞可產生5-羥色胺、腎上腺素、ACTH和甲狀旁腺素。COLO 320DM細胞角蛋白、波形蛋白弱陽性。

生物安全等級： 1

細胞規格： 1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測： 無

基因表達情況 serotonin; norepinephrine; epinephrine; adrenocorticotropic hormone (ACTH); parathyroid hormone

保藏機構 ATCC; CCL-220 BCRC; 60108 ECACC; 87061205；中國醫學基礎醫學研究所細胞資源中心

培養基： RPMI-1640+10% FBS+1%PS

培養條件： 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件： 無血清凍存液，液氮儲存

STR鑒定位點 Amelogenin：X；CSF1PO：11；D13S317：11；D16S539：11，12；D18S51：15；D19S433：16.2；D21S11：33.2；D2S1338：18，25；D3S1358：17；D5S818：12；D7S820：9，12；D8S1179：13；FGA：20；TH01：9；TPOX：8，9；vWA：15，18；

二、細胞培養操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）。第三天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

a、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

b、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

c、棄上清，沉淀細胞用12ml培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

d、待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

b、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

c、用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

d、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

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三、培養注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的培養基來培養細胞。  收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。