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上海西格生物科技有限公司
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LN229+LUC人膠質瘤細胞熒光素酶標記

參  考  價:3000
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

規格

1×106 3000元 15瓶可售

更新時間:2024-06-07 12:55:57瀏覽次數:177次

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貨號 XG-X3404 生長特性 貼壁細胞
細胞形態 上皮細胞樣 用途 僅供科研研究實驗
LN229+LUC人膠質瘤細胞熒光素酶標記公司正在出售的產品:MIA PaCa-2胰腺導管腺癌MIA-PACA-2 細胞專用培養基MIA-PACA-2人胰腺癌細胞MIA-PACA-2人胰腺癌細胞專用培養基mIMCD-3 細胞專用培養基MIN6 小鼠胰島瘤細胞MIN6(小鼠胰島瘤細胞)Min6胰島β細胞

一、細胞基本屬性

細胞名稱

LN229+LUC人膠質瘤細胞熒光素酶標記

生長特性

貼壁生長

種屬來源

商品貨號

XG-X3404

 

細胞介紹

該細胞建系于1979年,細胞來源于一個右額頂枕葉膠質母細胞瘤患者。細胞顯示p53突變,同時在p16及p14ARF 腫瘤抑制基因可能存在缺失。他們均含有野生型PTEN 基因。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1) 來源:膠質母細胞瘤

2) 形態:上皮細胞樣,貼壁生長

3) 含量:>1x10^6  細胞數

4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩定轉染Luc的細胞,隨細胞傳代次數的增加,其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養基維持培養,若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養基繼續篩選,以此類推,至藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養基培養,至細胞密度約80%,可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥培養基正常培養。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。

一.培養基及培養凍存條件準備

1) 準備DMEM培養基;優質胎牛血清,5%;雙抗,1%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二.細胞處理:

1) 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

LN229+LUC人膠質瘤細胞熒光素酶標記 

二、細胞培養操作

1) 復蘇細胞:以下細胞培養凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產品說明書為主

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養基,培養過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。

a、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;

b、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

c、棄上清,沉淀細胞用12ml培養基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;

d、待細胞貼壁后,觀察培養結果,之后進行換液培養或傳代。

3) 細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;

a、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;

b、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

c、用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;

d、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

LN229+LUC人膠質瘤細胞熒光素酶標記 

 

三、培養注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象 發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰破碎形成碎片,是正常現象。觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮的培養基重懸 細胞,并接種到新的培養瓶或培養皿中,置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞 的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注:運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的培養基來培養細胞。     收到細胞后次傳代建議 1:2 傳代 。

9. 注意:  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產品:

小鼠外周血單核細胞

人百日咳毒su(PT)elisa試劑盒

人腎上腺包膜成纖維細胞

人鞘脂激活蛋白原(PSAP)ELISA檢測試劑盒

人胰腺成纖維細胞

大鼠血管性血友病因子裂解蛋白mei(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA檢測試劑盒

人甲狀旁腺細胞

山羊分枝桿菌PCR試劑盒

人扁桃體動脈內皮細胞

馬流感病毒H3N8亞型RT-PCR試劑盒

人扁桃體動脈平滑肌細胞

肺孢子蟲通用PCR檢測試劑盒

人腮腺腫瘤細胞

嵴病毒PCR檢測試劑盒

人子宮內膜上皮細胞

甘草探針法PCR鑒定試劑盒

人子宮內膜平滑肌細胞

同馬皰疹病毒3型)馬疹病病毒PCR試劑盒

人甲狀腺微血管內皮細胞

細粒棘球絳蟲PCR檢測試劑盒

人扁桃體上皮細胞

弗氏檸檬suan桿菌PCR試劑盒

人扁桃體靜脈平滑肌細胞

福賽斯坦納菌PCR試劑盒

人扁桃體成纖維細胞

西方蜜蜂微孢子蟲PCR試劑盒

人胰腺癌細胞

LN229+LUC人膠質瘤細胞熒光素酶標記豬輪狀病毒通用PCR檢測試劑盒

人胰腺癌相關成纖維細胞

膜聯蛋白ⅣELISA試劑盒

 


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