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無(wú)論是食品、制藥還是生物行業(yè),純化都是至關(guān)重要的一步,關(guān)乎產(chǎn)品質(zhì)量。純化的方法多種多樣,包括層析、離心、透析等等。其實(shí),還有一種過(guò)濾技術(shù)正在悄然興起,那就是切向流過(guò)濾。
TFF (Tangential Flow Filtration)
TFF(Tangential Flow Filtration)切向流過(guò)濾是一種應(yīng)用于生物分子分離和純化的快速有效的方法。該方法可用于各生物領(lǐng)域,例如免疫學(xué)、蛋白質(zhì)化學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)和微生物學(xué)。TFF可用于對(duì)容量從10mL到數(shù)千升的樣品溶液進(jìn)行濃縮和脫鹽處理。此方法可用于分餾大小不一的生物分子、獲取細(xì)胞上清液,以及對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基和細(xì)胞裂解物進(jìn)行澄清處理。
那么,切向流過(guò)濾究竟是一種怎么樣的技術(shù)?通過(guò)一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)即可弄明白。假設(shè)你有一堆鵝卵石和沙粒,需要將它們分開(kāi)。也許你會(huì)說(shuō),那還不簡(jiǎn)單,找個(gè)篩子來(lái)就行了。其實(shí),事情并不是想象的那么簡(jiǎn)單。
當(dāng)較小的沙粒通過(guò)篩網(wǎng)落下時(shí),篩網(wǎng)表面會(huì)形成一個(gè)鵝卵石層,阻礙頂部的沙粒通過(guò),這是死端過(guò)濾(A圖)。這時(shí),再輕輕搖一搖,其實(shí),這就是切向流過(guò)濾(B圖)的原理,振動(dòng)篩子讓阻塞篩網(wǎng)的鵝卵石松開(kāi),從而讓頂部的沙粒更快通過(guò)。
對(duì)于傳統(tǒng)的過(guò)濾,由于液體的流動(dòng)方向是垂直于濾膜表面的,這種方法也被稱(chēng)為死端過(guò)濾(Dead-end Filtration)。與之相對(duì)的就是切向流過(guò)濾,也稱(chēng)為錯(cuò)流過(guò)濾(Cross-flow Filtration)。顧名思義,液體的流動(dòng)方向平行于濾膜表面。
由于切向流在過(guò)濾過(guò)程中對(duì)濾膜表面進(jìn)行不停的“沖刷",這種操作模式有效地緩解了大的顆粒和分子在膜上的堆積,因此能夠更加快捷高效地對(duì)生物分子進(jìn)行分離與純化處理。它的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在:與透析相比,裝配更輕松,處理速度也快很多;與離心濃縮裝置或攪拌式超濾裝置相比,可以在更短時(shí)間內(nèi)獲得更高濃度。
這種技術(shù)目前廣泛應(yīng)用于生物學(xué)領(lǐng)域、制藥領(lǐng)域以及食品行業(yè)。它可用于蛋白質(zhì)、肽或核酸的濃縮和脫鹽處理,也可用于不同大小生物分子的分離、細(xì)胞懸液收集,以及發(fā)酵液和細(xì)胞裂解液的澄清。
ATF(Alternating tangential flow filtration)
ATF(Alternating tangential flow filtration) 全稱(chēng)為交替切向流細(xì)胞截留系統(tǒng)。交替切向流過(guò)濾使用與TFF相似的技術(shù)。主要的區(qū)別是ATF是一個(gè)灌注過(guò)程,設(shè)計(jì)的目的是盡量減少過(guò)濾器污垢。
在ATF中,滲透液被收集起來(lái),同時(shí)隔膜泵在正壓和真空之間交替,使滯留液在膜上來(lái)回移動(dòng)。滯留物在每個(gè)循環(huán)之間返回生物反應(yīng)器,與下一批待過(guò)濾的流體混合。ATF 是收集滲透液中所需產(chǎn)品的理想選擇,因?yàn)闈B余液會(huì)不斷地被推回生物反應(yīng)器。
保持液的交替流動(dòng)清洗過(guò)濾器,使其比等效的TFF過(guò)濾器使用時(shí)間更長(zhǎng)或批量更大。
用于交替和切向流動(dòng)過(guò)濾的質(zhì)量流量
Alicat高精度、響應(yīng)快的雙向質(zhì)量流量控制器可以在正壓和真空之間切換。與隔膜泵一起工作,可以使用真空將流體拉過(guò)過(guò)濾器進(jìn)行初次滲透/滯留物分離,并使用正壓將滯留物返回反應(yīng)器。Alicat雙向質(zhì)量流量控制器是交替切向流動(dòng)過(guò)濾和切向流動(dòng)過(guò)濾的理想選擇。
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