R5421釀酒酵母菌株為K+/鉀離子缺陷型菌株，在文獻中也稱為CY162MATa型多用于K+鉀離子轉運蛋白的鑒定試驗中，也可用于K+/鉀離子通道或鈉鉀離子泵的鑒定試驗。Transformation marker為:ura3leu2，該菌株可以在含有100mMKCl的培養基中正常生長。在含有5-10mM KCl的培養基中生長緩慢，當培養基中KCI濃度低于0.5mMR5421(CY162)細胞停止生長。

操作方法:

1.CarrierDNA在每次使用前要通過加熱處理使其變性為單鏈狀態，步驟如下:CarrierDNA放

95℃水浴或金屬浴3min快速插入冰中靜置3min再次放95℃水浴或金屬浴3min快速插入冰中，靜置 3min 以上。

*備注:Carrier DNA加入請提前變性處理:95-100℃5min快速冰浴重復一次置于冰浴5min之內使用

2.取100u冰上融化的 R5421感受態細胞依次加入預冷的目的質粒0.5-3ugCarrier DNA 10ul PEG/LiAc 500ul并吸打幾次混勻30℃水浴 30min(15min時翻轉 6-8 次混勻)。

3.將管放42℃水浴15min(75min 時翻轉6-8次混勻)。

4.5000rpm離心40s棄上清ddH400ul重懸，離心30s棄上清。5ddH 50ul重懸，涂板、29℃培養 48-96h

注意事項:

1.感受態細胞zuihao在冰上融化。

2.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3.同時轉化 2-3種質粒時可增加質粒的用量

4R5421酵母菌株對高溫敏感zuishi生長溫度為27-30℃高于31℃生長速度和轉化效率呈指數下降。