β-內酰胺酶是一大類能夠水解β-內酰胺的酶。β-內酰胺環是所有β-內酰胺抗生素（包括qingmeisu衍生物，toubaojunsu，單bactams和碳青霉烯）中的常見元素。通過水解，β-內酰胺酶會破壞β-內酰胺環的打開，從而使分子的抗菌性能失活。通過合成β-內酰胺酶，來自臨床和非臨床環境的細菌對β-內酰胺抗生素的耐藥性越來越高。為了克服這種耐藥性，通常將β-內酰胺酶抑制劑（如克拉維酸）與β-內酰胺類抗生素一起使用。因此，檢測β-內酰胺酶活性對于評估β-內酰胺類抗生素以及預防抗生素耐藥性至關重要。AAT Bioquest' 比色β-內酰胺酶活性測定試劑盒提供了靈敏的比色測定法，用于測量生物樣品中的β-內酰胺酶活性。使用Nitrocefin可以檢測到β-內酰胺酶的活性，該酶在被β-內酰胺酶水解后會從黃色變為紅色。可以使用吸光度計酶標儀通過測量490 nm至380 nm波長下的OD比率來執行測定。

1. 準備β-內酰胺酶標準品或測試樣品（50 µL）

2. 加入β-內酰胺酶工作溶液（50 µL）

3. 在室溫下孵育30-60分鐘

4. 監測OD比為490/380 nm時的吸光度增加

重要說明
開始實驗前，在室溫下解凍每個試劑盒成分的小瓶。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，制備后應儲存在-20°C下。避免重復凍融循環。

1.β-內酰胺酶標準儲備液（50 mU / mL）：
將100 µL ddH ₂ O加入小瓶β-內酰胺酶標準液（組分C）中，制成50 mU / mLβ-內酰胺酶標準液。

配制標準溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

向990 µL 1x PBS緩沖液中加入10 µL 50 mU / mLβ-內酰胺酶標準溶液，以生成500 µU / mLβ-內酰胺酶標準溶液（SD7）。取500 µU / mLβ-內酰胺酶標準溶液（SD7），并在PBS中進行1：2連續稀釋，以得到連續稀釋的β-內酰胺酶標準溶液（SD6-SD1）。注意：稀釋的β-內酰胺酶標準溶液不穩定，應立即使用。

準備工作溶液

將50 µL硝苯丁酮原液（組分A）加入5 mL的測定緩沖液（組分B）中并充分混合，制成β-內酰胺酶工作溶液。注意：此β-內酰胺酶工作溶液足以用于一個96孔板。β-內酰胺酶工作溶液不穩定，每次使用都應準備新鮮。