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甘油是在肝臟和脂肪組織中合成甘油三酸酯和磷脂的前體。禁食時，儲存在這些脂質小滴中的甘油三酸酯可被水解產生游離甘油和脂肪酸。釋放到血液中的游離甘油的量與甘油三酸酯/脂肪酸循環速率成正比，這在代謝調節和產熱中很重要。Amplite™熒光甘油測定試劑盒提供了一種基于熒光的靈敏測定方法，用于測量生物樣品中的甘油水平。該測定法基于甘油的酶偶聯反應，其中可以在HRP偶聯反應中使用我們的Amplite™HRP底物檢測產物過氧化氫。熒光信號可以通過熒光酶標儀讀取。有了這種熒光甘油測定試劑盒，
| 熒光酶標儀 | |
| 激發 | 540納米 |
| 發射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組件A：Amplite™HRP底物（光敏） | 1個小瓶 |
| 組分B：酶混合物 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分C：測定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
| 組分D：甘油標準 | 80 µL /瓶 |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（100 µL） |
- 準備甘油標準品或測試樣品（50 µL）
- 加入甘油工作溶液（50 µL）
- 在室溫下孵育10-30分鐘
- 監控Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光增加
重要說明
為了獲得*效果，強烈建議使用黑色印版。開始實驗前，在室溫下解凍每個試劑盒成分的小瓶。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環。
1. Amplite™HRP底物儲液（200X）：
添加50 μ DMSO（成分E）的L放入Amplite™HRP底物（小瓶組分A ），以使200X Amplite™HRP底物儲備溶液。避光。
2.甘油標準溶液（1 mg / mL）：
將1 mL的ddH 2 O或1x PBS緩沖液添加到小瓶的甘油標準溶液（組分D ）中，制成1 mg / mL甘油標準溶液。
配制標準溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
將10μL的1 mg / mL甘油 標準溶液添加到990μL1x PBS緩沖液中， 以生成10μg/ mL的甘油標準溶液（GS7）。取10 µg / mL甘油標準溶液（GS7），并在1x PBS緩沖液中進行1：3系列稀釋，以得到系列稀釋的甘油標準液（GS6-GS1）。
準備工作溶液
1. 將5 mL測定緩沖液（組分C ）添加到一瓶酶混合物（組分B ）中，并充分混合。
2. 將25 µL 200X Amplite™HRP底物原液添加到組分B + C 的瓶子中，并充分混合以制成甘油工作液。注意： 這種甘油工作溶液足以用于一個96孔板。它不穩定，請及時使用。
程序
表1. 黑色96孔微孔板中甘油標準品和測試樣品的布局。GS =甘油標準品（GS1-GS7，0.01至10 µg / mL），BL =空白對照，TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| GS1 | GS1 | ... | ... |
| GS2 | GS2 | ... | ... |
| GS3 | GS3 | ||
| GS4 | GS4 | ||
| GS5 | GS5 | ||
| GS6 | GS6 | ||
| GS7 | GS7 |
表2. 每個孔的試劑組成
| 好 | 體積 | 試劑 |
| GS1-GS7 | 50微升 | 連續稀釋（0.01至10 µg / mL） |
| BL | 50微升 | 1X PBS緩沖液 |
| TS | 50微升 | 測試樣本 |
- 根據表1和2中提供的布局，準備甘油標準品（GS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
- 向甘油標準液，空白對照和測試樣品的每個孔中添加50 µL甘油工作溶液，以使甘油總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，應在每個孔中添加25 µL甘油工作溶液，總體積為50 µL /孔。
- 在避光條件下，于室溫下孵育反應10-30分鐘。
- 使用熒光板讀數器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）處監控熒光的增加。
13831 Amplite™熒光法β-羥基丁酸（酮體）檢測試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Beta-Hydroxybutyrate (Ketone Body) Assay Kit 200 Tests 13832 Amplite™比色法丙三醇檢測試劑盒 Amplite™ Colorimetric Glycerol Assay Kit 200 Tests
