辣根過(guò)氧化物酶（HRP）是一個(gè)小分子（MW?40 KD），廣泛用于各種生物檢測(cè)中。HRP偶聯(lián)物被廣泛用作ELISA，免疫組織化學(xué)技術(shù)，Northern，Southern和Western印跡分析的輔助檢測(cè)試劑。由于其體積小，它很少會(huì)引起抗體/抗原復(fù)合物形成的位阻問(wèn)題。通常以4：1的比例與抗體偶聯(lián)。另外，與其他標(biāo)記酶相比，HRP價(jià)格便宜。與過(guò)氧化物酶有關(guān)的主要缺點(diǎn)是它們對(duì)許多防腐劑的耐受性低，即使在低濃度下也能使過(guò)氧化物酶的活性失活。我們的Amplite™熒光ELISA分析試劑盒包含所有必需成分，包括用于ELISA檢測(cè)的熒光Amplite™Red HRP底物。該試劑盒提供了與HTS液體處理兼容的優(yōu)

1. 準(zhǔn)備ELISA板

2. 準(zhǔn)備過(guò)氧化物酶工作溶液

3. 將100 µL /孔的過(guò)氧化物酶工作溶液加入ELISA板

4. 在室溫下孵育15-60分鐘

5. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm的熒光強(qiáng)度

重要說(shuō)明
開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊性噭┖薪M件。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. Amplite™紅色過(guò)氧化物酶底物原液（200X）：
將250 µL DMSO（組分D）添加到Amplite™紅色過(guò)氧化物酶底物（組分A）的小瓶中。注意：50 µL的Amplite™Red過(guò)氧化物酶底物原液足以容納1個(gè)板。

2. H ₂ O ₂儲(chǔ)備溶液（20 mM）：
將22.7 µL的3％H ₂ O ₂（0.88 M，組分B）添加到977 µL的測(cè)定緩沖液（組分C）中。注意：稀釋的H ₂ O ₂儲(chǔ)備溶液不穩(wěn)定。未使用的部分應(yīng)丟棄。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)

小鼠IgG（不包括在內(nèi)）可用于生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。用3 µg / mL的初始濃度和1：3的稀釋倍數(shù)，用0.2 Mtansuanqingna緩沖液（pH 9.4）將總小鼠IgG稀釋到微孔板中。

準(zhǔn)備工作溶液

1.山羊抗小鼠IgG-HRP結(jié)合物工作溶液：
將2 µL山羊抗小鼠IgG-HRP結(jié)合物（組分E）添加到10 mL含1％BSA的PBS中（PBS-BSA，不包括在內(nèi)）。注意： 10 mL山羊抗小鼠IgG-HRP偶聯(lián)物工作液足以用于1個(gè)板。建議將此山羊抗小鼠IgG-HRP偶聯(lián)物工作溶液的濃度作為嘗試的初始濃度。每個(gè)具體應(yīng)用的*濃度應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

2.過(guò)氧化物酶工作溶液：在9.85 mL的測(cè)定緩沖液（組分C）中
加入50μLAmplite™紅色過(guò)氧化物酶底物儲(chǔ)備溶液（200X）和100μLH ₂ O ₂儲(chǔ)備溶液（20 mM）。 10 mL過(guò)氧化物酶工作溶液。遠(yuǎn)離光線(xiàn)。

程序

準(zhǔn)備ELISA板：

1. 執(zhí)行所有必要的ELISA制備步驟。
   

2. 用含有0.02％至0.05％吐溫的PBS洗滌ELISA孔三次^® 20（PBS-Tween中）和漏區(qū)。
   

3. 在每個(gè)孔中加入100 µL準(zhǔn)備好的山羊抗小鼠IgG-HRP結(jié)合物工作溶液。
   

4. 在室溫下孵育30分鐘。排出HRP共軛物。
   

5. 用PBS-Tween洗滌孔3次并瀝干。
   

在ELISA板中運(yùn)行過(guò)氧化物酶測(cè)定：

1. 將100 µL過(guò)氧化物酶工作溶液加到每個(gè)裝有樣品和對(duì)照的排水微孔板孔中。
   

2. 在避光的條件下，將反應(yīng)在室溫下孵育30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間。
   

3. 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)530-570 nm（*540 nm）和發(fā)射590-600 nm處監(jiān)控?zé)晒獾脑黾印?em>注意：該板也可以通過(guò)吸光度酶標(biāo)儀在576±5 nm的波長(zhǎng)下讀取。但是，與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測(cè)的靈敏度較低。

   	11540	Amplite™熒光法羊抗鼠IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光*	Amplite™ Fluorimetric Goat Anti-Mouse IgG-HRP Conjugate ELISA Assay Kit *Red Fluorescence*	1 kit
   	11541	Amplite™熒光法羊抗兔IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光*	Amplite™ Fluorimetric Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Conjugate ELISA Assay Kit *Red Fluorescence*	1 kit
   	11551	Amplite™比色法過(guò)氧化酶檢測(cè)試劑盒 *藍(lán)色*	Amplite™ Colorimetric Peroxidase Assay Kit *Blue Color*	1 kit
   	11552	Amplite™熒光法過(guò)氧化酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光*	Amplite™ Fluorimetric Peroxidase Assay Kit *Red Fluorescence*	1 kit
   	11553	Amplite™熒光法過(guò)氧化酶檢測(cè)試劑盒 *近紅外熒光*	Amplite™ Fluorimetric Peroxidase Assay Kit *Near Infrared Fluorescence*	1 kit
   	11559	Amplite™發(fā)光法過(guò)氧化酶檢測(cè)試劑盒	Amplite™ Luminometric Peroxidase Assay Kit	1 kit