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單胺氧化酶（MAO）是一類含有黃素的胺氧化還原酶，可催化單胺的氧化。發現它們與包括肝，腸粘膜和神經在內的許多組織的線粒體外膜結合。在人類中，有兩種類型的MAO：MAO-A和MAO-B。MAO-A在食物中攝取的單胺的代謝中特別重要。MAO在神經遞質失活中起主要作用。MAO功能障礙與抑郁癥，精神分裂癥，藥物濫用，注意缺陷障礙，偏頭痛和不規則的性成熟有關。Amplite™單胺氧化酶測定試劑盒提供了一種快速靈敏的方法，用于測量血液樣品和其他生物樣品中的單胺氧化酶和氨基脲敏感的胺氧化酶（SSAO）活性。該套件使用我們的Amplite™Red底材，可實現雙重記錄模式。信號可以通過熒光酶標儀或吸光度酶標儀輕松讀取。使用Amplite™單胺氧化酶測定試劑盒，在100 µL反應體積中，我們僅檢測到10 µU / mL SSAO。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，并易于適應自動化。
| 熒光酶標儀 | |
| 激發 | 540納米 |
| 發射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 成分A：Amplite™紅色（光敏） | 1個小瓶 |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（20毫升） |
| 組分C：辣根過氧化物酶（凍干） | 1個小瓶 |
| 成分D：MAO底物 | 1小瓶（50 µL） |
| 組分E：血漿胺氧化酶標準品（凍干） | 1小瓶（2.5單位） |
| 成分F：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
- MAO標準品或測試樣品（50 µL）
- 添加MAO工作溶液（50 µL）
- 在室溫下孵育30-60分鐘
- 在Ex / Em = 540/590 nm處讀取熒光強度（截止570 nm）
重要說明
在開始實驗之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環。
1. Amplite™Red儲備液（250X）：
將40 µL DMSO（組分F）添加到Amplite™Red底物（組分A）的小瓶中。儲備溶液應及時使用。注意：在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT））存在下，Amplite™Red底物不穩定。反應中DTT的終濃度應不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩定。因此，反應應在pH 7 – 8下進行。建議使用提供的測定緩沖液pH 7.4。
2. HRP儲備溶液（200X）：
將100 µL測定緩沖液（組分B）添加到辣根過氧化物酶（組分C）小瓶中。
3.血漿胺氧化酶（PAO）標準溶液（20 U / mL）：
將125 µL測定緩沖液（組分B）添加到血漿胺氧化酶標準品（組分E）的小瓶中。
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
將50 µL 20 U / mL PAO標準溶液加到950 µL測定緩沖液（組分B）中，得到1000 mU / mL PAO標準溶液（PAO7）。取1000 mU / mL PAO標準溶液并進行1：3連續稀釋，以得到剩余的連續稀釋的PAO標準溶液（PAO6-PAO1）。注意：由于Amplite™紅色底物（變成非熒光產品）的過度氧化，較高的PAO濃度可能導致熒光信號降低。
準備工作溶液
將20 µL的Amplite™Red儲備液（250X），25 µL的HRP儲備液（200X）和25 µL的MAO底物（組分D）加入5 mL的測定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.07 mL單胺氧化酶（MAO）工作溶液。避光。
程序
表1.黑色實心96孔微孔板中PAO標準品和測試樣品的布局。PAO =血漿胺氧化酶標準品（PAO1-PAO7，1至1000 mU / mL）; BL =空白對照；TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| 1號 | 1號 | ... | ... |
| PAO2 | PAO2 | ... | ... |
| 3號 | 3號 | ||
| PAO4 | PAO4 | ||
| PAO5 | PAO5 | ||
| PAO6 | PAO6 | ||
| PAO7 | PAO7 |
表2.每個孔的試劑組成
| 好 | 體積 | 試劑 |
| PAO1-PAO7 | 50微升 | 連續稀釋（1至1000 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 樣品 |
- 根據表1和表2提供的布局，將血漿胺氧化酶標準品（PAO），空白對照（BL）和測試樣品（TS）制備到96孔固體黑色微孔板中。對于384孔板，請使用25每孔微升試劑，而不是50微升。
- 在PAO標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 µL MAO工作溶液，以使PAO測定總體積為100 µL /孔。對于384孔板，將25 µL MAO工作溶液添加到每個孔中，總體積為50 µL /孔。
- 在避光條件下，室溫下將反應孵育30至60分鐘。
- 使用熒光板讀數器在激發= 530-570，發射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm，截止= 570 nm）下監控熒光強度。注意： 該板的內容物也可以轉移到白色的透明底板上，并通過吸光度酶標儀在576±5 nm的波長下讀取。但是，與熒光讀數相比，吸收檢測的靈敏度較低。
11304 Amplite™熒光法黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Xanthine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11305 Amplite™比色法超氧化物歧化酶（SOD）檢測試劑盒 Amplite™ Colorimetric Superoxide Dismutase (SOD) Assay Kit 1 kit 11306 Amplite™熒光法過氧化氫酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Catalase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit
