guansuan氧化酶屬于氧化還原酶家族,特別是那些以氧為受體作用于供體的CH-NH2基團的酶。它是一種酶,可在水和氧氣存在下特異性催化L-guansuan的氧化脫氨反應,并生成鄰-酮戊二酸,氨和過氧化氫。Amplite™熒光
guansuan氧化酶測定試劑盒提供了一種快速,超靈敏的方法,用于測量溶液和細胞裂解物中的guansuan氧化酶。在該測定中,L-guansuan被guansuan氧化酶氧化為β-酮戊二酸,NH 3和H 2 O 2。反應中包含L-bingansuan和L-guansuan-丙酮酸轉氨酶,導致多個循環的初始反應,從而顯著放大了H2O2的產生。該套件使用我們的Amplite™Red底材,可實現雙重記錄模式。熒光信號可通過熒光酶標儀或吸光度酶標儀輕松讀取。借助Amplite™guansuan氧化酶測定試劑盒,我們在100 µL反應體積中檢測到低至40 µU / mL的guansuan氧化酶。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行,無需分離步驟即可輕松實現自動化。
熒光酶標儀 | |
激發 | 540納米 |
發射 | 590納米 |
隔斷 | 570納米 |
推薦板 | 純黑色 |
成分A:Amplite™紅色(光敏) | 1個小瓶 |
組分B:測定緩沖液 | 1瓶(20毫升) |
組分C:辣根過氧化物酶(凍干) | 1個小瓶 |
組分D:guansuan | 1小瓶(3.4毫克) |
成分E:guansuan氧化酶標準品(凍干) | 1小瓶(15 mU,凍干) |
成分F:DMSO | 1小瓶(200 µL) |
氧化酶標準品或測試樣品(50 µL)
guansuan
加入氧化酶工作溶液(50 µL)
guansuan
在室溫下孵育30-60分鐘
在Ex / Em = 540/590 nm時讀取熒光強度
重要說明
在開始實驗之前,將所有套件組件解凍至室溫。
儲備溶液的制備
除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣,并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環。
1. Amplite™Red儲備液(250X):
將40 µL DMSO(組分F)添加到Amplite™Red(組分A)小瓶中。儲備溶液應及時使用。注意:Amplite™Red在存在硫醇(如二硫蘇糖醇(DTT)的情況下不穩定。反應中DTT的終濃度應不高于10 µM。Amplite™Red在高pH(> 8.5)下也不穩定。因此,反應應在pH 7-8下進行。建議使用提供的測定緩沖液pH 7.4。
2. HRP儲備溶液(400X):
將200 µL測定緩沖液(組分B)加到辣根過氧化物酶(組分C)小瓶中。
3.guansuan儲備溶液(400X):
將1.0 mL ddH 2 O加入小瓶guansuan(組分D)中,制成400Xguansuan儲備溶液。
4.guansuan氧化酶(GO)標準溶液(150 mU / mL):
將100 µL測定緩沖液(組分B)添加到小瓶guansuan氧化酶標準液(凍干,組分E)中,制成150 mU / mLguansuan氧化酶(GO)標準溶液。
配制標準溶液
為了方便起見,請使用我們的系列稀釋計
將30 µL的150 mU / mL GO標準溶液添加到420 µL的測定緩沖液(組分B)中,以獲得10 mU / mL的GO標準溶液(GO7)。取10 mU / mL的GO標準溶液進行1:3的系列稀釋,以得到剩余的系列稀釋的GO標準液(GO6- GO1)。
準備工作溶液
將20μL的Amplite™Red儲備液(250X),12.5μL的HRP儲備液(400X)和12.5μL的guansuan儲備液(400X)加入5 mL的測定緩沖液(組分B)中,使總體積為5.07 mLguansuan氧化酶工作液(GO工作液)。避光。
程序
表1.黑色標準96孔微孔板中GO標準品和測試樣品的布局。GO =guansuan氧化酶標準品(GO1-GO7,0.01至10 mU / mL),BL =空白對照,TS =測試樣品。
BL | BL | TS | TS |
GO1 | GO1 | ... | ... |
GO2 | GO2 | ... | ... |
GO3 | GO3 | ||
GO4 | GO4 | ||
GO5 | GO5 | ||
GO6 | GO6 | ||
GO7 | GO7 |
表2. 每個孔的試劑組成。較高濃度的GO可能會由于Amplite™Red(過度生成非熒光產品)的過度氧化而導致熒光信號減弱。
好 | 體積 | 試劑 |
GO1-GO7 | 50微升 | 連續稀釋(0.01至10 mU / mL) |
BL | 50微升 | 分析緩沖液(組分B) |
TS | 50微升 | 測試樣本 |
根據表1和表2提供的布局,準備GO標準液(GO),空白對照(BL)和測試樣品(TS)。對于384孔板,每孔使用25 µL試劑,而不是50 µL。
在GO標準液,空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 µL GO工作溶液,以使GO測定總體積為100 µL /孔。對于384孔板,將25 µL GO工作溶液添加到每個孔中,總體積為50 µL /孔。
在避光條件下,室溫下將反應孵育30至60分鐘。
使用熒光板讀數器在激發= 530-570 nm,發射= 590-600 nm(*Ex / Em = 540/590 nm),截止= 570 nm時監控熒光強度。注意:該板的內容物也可以轉移到白色的透明底板上,并通過吸光度酶標儀在576±5 nm的波長下讀取。與熒光讀數相比,吸收檢測的靈敏度較低。
數據分析
1e+4100010010.1- Dose-responseData legendGenerated with Quest Graph™Glutamate Oxidase (mU/mL)RFUX: 0.1768Hover mouse to interactY: 526.58Y: 526.58
從空白標準孔獲得的讀數(RFU)用作陰性對照。從其他標準的讀數中減去該值即可得到基線校正值。然后,繪制標準讀數,以獲得標準曲線和方程式。該方程式可用于計算guansuan氧化酶樣品。我們建議您使用在線線性回歸計算器,
11303 | Amplite™熒光法單胺氧化酶檢測試劑盒 *紅色熒光* | Amplite™ Fluorimetric Monoamine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* | 1 kit |
11304 | Amplite™熒光法huangpiaoling氧化酶檢測試劑盒 *紅色熒光* | Amplite™ Fluorimetric Xanthine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* | 1 kit |
11305 | Amplite™比色法超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒 | Amplite™ Colorimetric Superoxide Dismutase (SOD) Assay Kit | 1 kit |
11306 | Amplite™熒光法過氧化氫酶檢測試劑盒 *紅色熒光* | Amplite™ Fluorimetric Catalase Assay Kit *Red Fluorescence* | 1 kit |