EvaGreen 是一種用于實時定量 PCR(qPCR)的DNA結合染料。它的諸多優點使它遠勝于SYBR Green I。除了有相似的光譜特性,EvaGreen有三個主要特點使它區別于SYBR Green I。
EvaGreen對PCR的抑制性遠小于SYBR Green I。因此,使用EvaGreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟。同時,EvaGreen在實驗中可以使用較高的濃度,從而獲得遠強于SYBR Green I擴增信號。較高濃度的EvaGreen也消除了“染料重分布"的缺陷,使EvaGreen既可用于多重PCR,也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲線分析(HRM)。該分析正被越來越多的用于PCR后的基因分型和異源雙鏈分析。由于SYBR Green I對PCR的抑制性,從而要求其使用濃度必須很低,因此 SYBR Green I無法解決由低濃度造成的染料重分布問題,既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同時,染料重分布問題也可能影響常規熔解曲線的可靠性,因為低熔點的DNA鏈可能由于這種原因而無法檢測到 。
EvaGreen的穩定性*。在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,也可以反復凍融。與之相反,SYBR Green I不穩定而且降解后對PCR抑制性更強 。
EvaGreen降低了細胞膜透性,因而比SYBR Green I更加安全。測試結果顯示,EvaGreen既沒有誘變性也沒有細胞毒性。相反,雖然 SYBR Green I本身誘變性很弱,但它在細胞中可能抑制了正常DNA的修復機制,使其有誘變增強作用。
EvaGreen的特性:
1. *的靈敏度:在推薦濃度下使用時可以獲得*的PCR擴增信號。
2. PCR 抑制性極小:智能化的“按要求釋放"DNA結合技術使得EvaGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I。
3. 和快速PCR兼容:對PCR干擾極小,從而極大的縮短了PCR延伸時間。
4. 非常適合HRM分析:無“染料重分布"缺陷,兼容PCR后的高分辨率熔解曲線(HRM)分析。
5. 兼容多重 PCR:在推薦濃度下使用時,無擴增子之間的染料遷移現象。
6. *穩定性:在大部分生化條件下非常穩定,可在室溫下儲存并可反復凍融。
7. 安全性好:細胞膜穿透性測試表明,EvaGreen幾乎不能穿透細胞膜,安全性高。
8. *的兼容性:和SYBR Green I光譜相似,和各的qPCR儀器兼容。用EvaGreen 替代SYBR Green I,無需改變任何您目前使用的操作步驟和儀器設備。