Applied Cell®Xeno-Free 人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基（無酚紅）

產品基本信息

產品簡介

Xeno-Free 人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基（無酚紅）是埃澤思生物（Applied Cell®）自主研發(fā)的一款無外源動物

成分的人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基。可應用于人類骨.髓、脂肪、臍.帶等組織來源的間充質干細胞的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)，

并保持其多向分化潛能。本產品內毒素水平遠低于中國藥典標準，生產過程遵循ISO9001 體系,并符合 GMP 指導原則。

Xeno-Free 人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基主要成分：氨基酸，維生素、無機鹽、白蛋白，轉鐵蛋白、胰島素、微量元素，細胞因子等。

產品特性

? 無外源動物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風險。

? 全程無血清生產，極大降低批次間差異。

? 可用于原代分離，且培養(yǎng)過程無需包被培養(yǎng)板。

? 擴增效率高，24h 左右增殖翻倍，節(jié)省培養(yǎng)時間。

? 內毒素<0.06EU/ml，遠低于中國藥典水

產品內容

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無血清細胞凍存液（治.療級）（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006）

人臍帶間充質干細胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001003）

人脂肪間充質干細胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001004）

細胞消化液（Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024）

實驗準備

人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基配制

1.1. 37℃快速解凍人間.充質干.細胞.培養(yǎng)基添加劑，快速溶解時不易破壞添加劑中營養(yǎng)物質，時間大致為 10min。

待添加劑融化后搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲存于-20℃至-80℃，避免反復凍融 。

1.2. 將添加劑以 10%比例加入到人間充質干細胞基礎培養(yǎng)基中，混勻，即為人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基

（AC-1001003PRF）。混合后培養(yǎng)基可在 2-8℃ 穩(wěn)定儲存 2-3 周，不建議使用已配制超過 3周的培養(yǎng)基。

1.3. 人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基可直接應用于人類骨.髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質干細胞的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)。

操作方法(以下步驟皆應在無菌條件下操作)

hMSC細胞復蘇(10cm dish)

1.1. 從液氮中取出凍存的 hMSC 細胞，迅速將凍存管放入 37℃水浴快速融解。

1.2. 在生物安全柜或超凈臺中，將解凍后的細胞懸液緩慢加入 5 mL 預溫的人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基（AC-1001003PRF）。

1.3. 1200rpm 離心 3 min，吸掉上清，加入 10mL 人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基重懸細胞。

1.4. 將細胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動培養(yǎng)皿使細胞均勻分布，5% CO2 的 37℃恒溫細胞培

養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 小時后觀察細胞狀態(tài)。

1.5. 24h 后更換新鮮人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每 2-3 天更換培養(yǎng)液。

hMSC細胞傳代培養(yǎng)

2.1. 在顯微鏡下觀察細胞，當細胞融合度達到 90%，即可傳代。

2.2. 在超凈臺/安全柜中，吸掉原有培養(yǎng)基，加入 PBS 溶液清洗一次，加入細胞消化液（AC-1001024）使之完.全覆蓋皿/瓶底。

2.3. 室溫孵育 4-5 分鐘或 37℃孵育 2-4 分鐘，顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。

2.4. 加入消化液 2 倍體積的人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完.全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞完.全分散。

2.5. 將細胞懸液轉移到 15 mL 離心管中，1200 rpm 離心 3 min。

2.6. 棄上清，加入人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基，重懸細胞，計數。1：3-1：4 比例傳代，或按 1-2x104

cells/cm²傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意：細胞傳代所需的時間：2-4 天。5 代及之前的細胞，生長速度較快。5 代以后的細胞，生長速度稍緩。

hMSC細胞凍存

3.1. 細胞達到 90%匯合度， 吸掉原有培養(yǎng)基，PBS 清洗一次。

3.2. 加入細胞消化液（AC-1001024）使之完.全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育 4-5min 或 37℃孵育 2-4min

分鐘，顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。

3.3. 加入消化液 2 倍體積的人間.充質.干細胞.培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完.全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，

使細胞完.全分散。

3.4. 將細胞懸液轉移到 15 mL 離心管中，1200 rpm 離心 3 min，吸掉上清。

3.5. 加入適量無血清細胞凍存液（治.療級）（AC-1001006），調整細胞凍存密度在 1×106 cells/mL左右，

每支凍存管分裝 1.5-2ml。

3.6. 直接放入-80℃，24h 后轉入液氮中長期保存。

質量控制