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單克隆抗體和多克隆抗體性質上的區(qū)別
2023-4-20 閱讀(117)
機體受抗原刺激后，由淋巴系統(tǒng)的細胞(主要是B淋巴細胞分化后的漿細胞)產(chǎn)生具有特異性免疫功能球蛋白，即抗體。抗原物質上能刺激B淋巴細胞的結構部位叫做抗原決定簇，一個抗原具備多個抗原決定簇，只針對一個抗原決定簇起作用的漿細胞群就是一個純系，即一種克隆，由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。機體受到抗原的刺激往往會針對抗原的多個抗原決定簇相應的產(chǎn)生多克隆抗體，多克隆抗體能與抗原的多處抗原決定簇結合。由一種漿細胞克隆產(chǎn)生的特異性結合抗原單一抗原決定簇的抗體即為單克隆抗體。多克隆抗體可以看作是多種單克隆抗體的混合物。抗體是我們實驗中zui 常用到的一種物質之一，抗體主要是分為單克隆抗體和多克隆抗體兩大類，單克隆抗體和多克隆抗體性質上的區(qū)別:
1、特異性
多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的集合，它們有的特異性高，有的特異性低，總體特異性符合正態(tài)分布曲線的形式，而其特異性的總體表現(xiàn)也應處于統(tǒng)計學正態(tài)曲線中位線（MID）的水平。而單抗制備后續(xù)的篩選過程，可去除大部分的非特異抗體，保留幾株特異性較好的單克隆抗體。
一般而言，單克隆抗體的確具有更高的特異性。
多抗特異性可通過生產(chǎn)環(huán)節(jié)比如使用高純度的免疫原，以及使用提純的靶點蛋白對多抗進行免疫親和層析純化等方法得以改進。經(jīng)過免疫親和層析的多抗其總體特異性將大大提升，與單抗相比已相差無幾。
2、關于假陽性
根據(jù)抗體最核心的表位結合區(qū)域—互補決定區(qū)（Complementarity Determining Region，CDR）的結構，抗體通?？梢跃o密結合的抗原表面區(qū)域或表位面積很小，對于變性的肽段約在4-8個Aa以內(nèi)，以及5-7個單糖的糖鏈或6-8個核苷酸的核酸。通過肽段BLAST可以得知，小肽段序列wan全相同的情況將在很多不同蛋白上發(fā)生。這意味著單抗識別的這個表位可能并不僅僅屬于靶標蛋白本身，也即意味著，即使利用純化抗原蛋白進行了特異性篩選的單克隆抗體，當用其檢測復雜樣本時，也將面臨交叉反應或假陽性問題。
3、靈敏度
特異性決定了假陽性結果的多少，敏感性決定了檢出率的高低。在復雜樣本中，由于多克隆抗體識別抗原的多個表位，可以在一個抗原分子上結合更多的抗體分子，也可以在當部分抗原表位受到一定程度的遮蓋或破壞時，仍有抗體結合在未受影響的表位上。這種情況常發(fā)生在如石蠟包埋的免疫組化（IHC-P）等實驗中，當樣本經(jīng)甲醛交聯(lián)固定后，即使經(jīng)過抗原修復，抗原表位也不可避免地受到了影響，此時單克隆抗體由于只識別一個表位，結合能力可能大大降低甚至呈現(xiàn)陰性結果，而只要不是所有表位都受到了破壞，多抗仍可以獲得該靶點的陽性結果。同樣的，對于樣本中一些表達豐度極低的蛋白，由于多表位結合更多抗體分子，檢測信號就將被放大。因此，使用多抗具有靈敏度和檢出率上的優(yōu)勢。
