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分析細胞培養污染
2022-6-28 閱讀(183)
細胞培養（cell culture)也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。細胞培養泛指所有體外培養，其含義是指從動物活體體內取出組織，于模擬體內生理環境等特定的體內條件下，進行孵育培養，使之生存并生長。細胞培養過程很容易受到污染。
細胞培養污染的可能原因:
1. 可能原因很多，比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等。
2.關于培養基的無菌狀況，取培養基至培養瓶中(不加細胞)，37℃試培養一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。
3. 也可以在培養基中事先加入雙抗(硫酸鏈霉su和氨芐青霉su)。但雙抗有時會影響細胞的狀態，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。除特殊要求外，建議培養基中添加雙抗比較好。
常見的污染源如下：
1、細菌：
細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。
仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！
可在培養液中加相應的抗生素處理。
2、霉菌：
培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態變差。
用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二Na高鹽液體,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板，箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右)，尤其在多雨的季節。
其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。
預防霉菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌su 或放線菌su D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌su或放線菌suD或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。將環境*消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3、支原體：
黑色的，多為多形，培養液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢si去。
用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養，無任何不良反應。victoryx公司的使用時用50ug/ml DMEM培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
4、黑膠蟲：
可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5、真菌：
一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6、原蟲：
培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，最終形成惡性循環。
避免污染有效辦法：
1、孵箱應定期用三氧機消毒或者紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水；
2、超凈臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素；
3、超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格，否則也可能能致霉菌污染；
4、無菌室經甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。
