磺胺類藥物的危害及檢測目的
磺胺類藥物是指在結構上具有對氨基苯磺酰胺的一類化合物的總稱,主要適用于預防和治療細菌感染性疾病的化學廣譜抗菌藥,種類繁多,應用廣泛。磺胺類藥物是應用較早的一類人工合成抗菌藥,也是食品安全國家標準食品中獸藥較大殘留*(GB31650-2019)中規定允許使用的一類藥物。但是允許使用不代表濫用,任何藥物的不當使用都可能導致動物可食部分藥物富集,磺胺類藥物的廣泛使用同樣帶來了這個問題。磺胺類藥物殘留會對人體產生泌尿系統損害及肝損害、造血系統損害、過敏、細菌耐藥性等危害,對人體健康造成威脅。
本文闡述了如何將磺胺類藥物從樣品基質中分離提取出來,并經過凈化后,轉化成液質聯用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點,依據國標GB/T21316-2007,為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。
檢測項目:磺胺類藥物
應用范圍:食品/動物源性食品/肝、腎、肌肉、水產品和牛奶等
方法原理:試樣中加入C18填料后研磨均勻,用乙腈-水在微波輻照輔助下進行提取,乙腈飽和正己烷液液分配凈化。液相色譜-質譜/質譜測定,外標法定量。
前處理儀器:高速組織搗碎機;均質器;旋轉蒸發器;氮吹儀;渦旋混勻器;分析天平:感量0.1mg和0.01g;真空泵;移液器1mL,,2mL;棕色雞心瓶150mL;樣品瓶2mL,帶聚四氟乙烯旋蓋;大號玻璃研缽;pH計,測量精度±0.2;離心機;棕色分液漏斗100mL;具螺旋蓋聚四氟乙烯離心管50mL;超純水儀;微波爐,家用,帶有光波模式,功率700W;超聲波發生器。
檢測儀器:LC-MS/MS+ESI源
試樣制備
1、肌肉、內臟、魚和蝦
從原始樣品中取出代表性樣品,經高速組織搗碎機均勻搗碎,用四分法縮分出適量試樣,均分成兩份,分別裝入清潔容器內,加封后作出標記,一份作為試樣,一份作為留樣。將試樣于-20℃保存。
2、腸衣
從原始樣品中取出代表性樣品,用剪刀剪成4mm2的碎片,用四分法縮分出適量試樣,均分成兩份,分別裝入潔凈容器內,加封后作出標記,一份作為試樣,一份作為留樣。將試樣于-20℃保存。
3、牛奶
從原始樣品中取出代表性樣品,用組織搗碎機充分混勻,均分成兩份,分別裝入潔凈容器內,加封后作出標記,一份作為試樣,一份作為留樣。將試樣于4℃避光保存。
前處理方法
1、提取
肌肉、內臟、魚、蝦和腸衣
稱取2g(精確至0.01g)試樣置于玻璃研缽中,再稱取約6g(精確至0.01g)C18填料(40μm)加至試樣上用玻璃杵輕輕研磨,使樣品與填料混合均勻(色澤均一,狀態分散),裝于50mL具螺旋蓋聚四氟乙烯離心管中,加入25mL乙腈-水(100:3V/V)溶液,旋渦振蕩1min,放入家用微波爐中在光波模式下微波輻照30s,3000r/min離心5min,將乙腈層移入100mL棕色分液漏斗中。離心后的沉淀物再加入25mL乙腈搖勻,微波輔助提取30s,3000r/min離心5min,合并乙腈提取液,待凈化。
牛奶
取2g(精確至0.01g)牛奶,置于玻璃研缽中,加入6g(精確至0.01g)硅藻土,另加入6g(精確至0.01g)C18填料,用玻璃杵輕輕研磨30s,使樣品與填料混合均勻(色澤均一,狀態分散),裝于50mL具螺旋蓋聚四氟乙烯試管中,加入25mL乙腈-水(100:3V/V)溶液,旋渦振蕩1min,放入家用微波爐中在光波模式下微波輻照30s,于3000r/min離心5min,將乙腈層移入100mL棕色分液漏斗中。離心后的沉淀物再加入25mL乙腈搖勻,微波輔助提取30s,于3000r/min離心5min,合并乙腈提取液,待凈化。
2、凈化
提取液中加入25mL乙腈飽和正己烷溶液,振搖5min,將底層乙腈溶液移入150mL棕色雞心瓶中,加入10mL正丙醇,用旋轉蒸發儀于45℃水浴中減壓蒸發至近干,氮氣流吹干。準確加入1mL乙腈-水(1:1V/V)溶液,超聲30s溶解殘渣,將溶解液移入10mL棕色離心管中,加0.5mL乙腈飽和正己烷,渦旋振蕩2min,于3000r/min離心5min,棄去正己烷溶液,取底層乙腈-水溶液過0.22μm微孔濾膜,供高效液相色譜-質譜/質譜測定。
注意事項
1、因為磺胺類藥物在光照下容易分解,其標準儲備溶液需要避光存放,使用棕色試劑瓶保存。濃度為0.1mg/mL的標準儲備液可在-20℃避光存放12個月。
2、該國標方法采用二次提取沉淀物的方式提高回收率。
3、提取液減壓旋轉蒸發時控制好溫度和轉速,防止爆沸,隨時觀察,至近干時及時停止取出雞心瓶。
4、由于該國標方法沒有使用相對應的同位素內標來校正回收率,建議使用相應的空白樣品基質提取液配制標準曲線。