動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定的前處理方法

時間：2020/8/17閱讀：2366

氯霉素類藥物的危害及檢測目的

氯霉素類藥物主要包括氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素，又稱為酰胺醇類，屬于廣譜抗生素，對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有抑制作用。由于氯霉素合成容易價格低，治療食品動物傳染性疾病效果較好，所以有在養殖過程中使用氯霉素的違法行為，從而造成動物源性食品中氯霉素殘留。研究證明氯霉素可引發人體造血系統疾病，產生細菌耐藥性等危害。2020年我國農業農村部公告第250號，將氯霉素及其鹽、酯列入《食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單》中。

本文闡述了如何將氯霉素類藥物從樣品基質中分離提取出來，并經過凈化后，轉化成液質聯用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點，依據國標GB/T 22338-2008，為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。

檢測項目：氯霉素類藥物

應用范圍：動物源性食品/水產品//畜禽產品/畜禽副產品

液相色譜-質譜/質譜法

方法原理：針對不同動物源性食品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素殘留，分別采用乙腈、乙酸乙酯-乙醚或乙酸乙酯提取，提取液用固相萃取柱進行凈化，液相色譜-質譜/質譜儀測定，氯霉素采用內標法定量，甲砜霉素和氟甲砜霉素采用外標法定量。

前處理儀器：

高速組織搗碎機；均質器；旋轉蒸發儀；分析天平；移液槍（200 μL 和1 mL）；心形瓶（100 mL棕色）；分液漏斗（200 mL）；聚四氟乙烯離心管（50 mL）；離心機；渦旋混合器；固相萃取裝置。

檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源

試樣制備

從原始樣品中取出部分有代表性樣品，經高速組織搗碎機均勻搗碎或混勻，用四分法縮分出適量試樣，均分成兩份，裝入清潔容器內，加封后作出標記，一份作為試樣，一份作為留樣，于-20 ℃條件下保存。

前處理方法

1.提取

動物組織（肝、腎除外）與水產品

稱取試樣5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入100 μL氯霉素氘代內標（氯霉素-D₅0.1μg/mL）工作溶液和30 mL乙腈，勻漿，離心5 min。將上清液移入250 mL分液漏斗中，加15 mL乙腈飽和的正己烷，振蕩5 min，靜置分層，轉移乙腈層至100 mL棕色心形瓶中。殘渣中再加入30 mL乙腈，振搖3 min，離心5 min，取上清液轉移至同一分液漏斗，振蕩5 min，靜置分層，轉移乙腈層至同一棕色心形瓶中。向心形瓶中加入5 mL正丙醇，于40 ℃水浴中旋轉蒸發近干，用氮氣吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解殘渣。

動物肝、腎組織

稱取試樣5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入30 mL乙酸鈉緩沖液（0.1 mol/L pH 5.0），均質2 min，加入300 μL β-葡萄糖醛酸苷酶，于37 ℃溫育過夜。消解樣品中加入100 μL氯霉素氘代內標（氯霉素-D₅0.1 μg/mL）工作溶液，20 mL乙酸乙酯-乙醚（75+25），振搖2 min，離心5 min。取上層有機層入心形瓶中，在40 ℃水浴中旋轉蒸發近干，用氮氣吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解殘渣。

蜂蜜

稱取蜂蜜試樣5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入100 μL氯霉素氘代內標（氯霉素-D₅0.1μg/mL）工作溶液，5 mL水，混勻，再加入20 mL乙酸乙酯，振搖2 min，離心5 min，移取有機層到100 mL棕色心形瓶中，于離心管中再加入20 mL乙酸乙酯，振搖2 min，離心5 min，合并有機層于棕色心形瓶中，40 ℃水浴中旋轉蒸發至干，3 mL水溶解殘渣，混勻。