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本產品僅供科學實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

細胞簡介：

人牙周膜成纖維分離自牙周膜組織；牙周膜（牙周韌帶、牙周間隙）是由致密結締組織所構成。多數纖維排列成束，纖維的一端埋于牙骨質內，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內；牙周膜內有神經、血管、淋巴和上皮細胞等。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的牙周膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。牙周膜成纖維細胞（PLFs）作為牙周膜的主體細胞，是牙周膜主要的間質細胞，它不僅具有合成膠原、基質、彈力纖維和糖蛋白的功能，還有吸收膠原吞噬異物的能力，還參與了牙周組織的病變、修復及再生過程。現在，利用牙周膜細胞建立體外模型，已經成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段。

原代細胞培養條件：

?溫度?：通常在37℃下進行，以模擬體內溫度。

?pH值?：培養液的pH值應保持在7.2~7.4之間，以維持細胞的正常生理狀態。

?氣體環境?：在含有5% CO2的培養箱中進行，以促進細胞生長。

?培養基?：使用含有適當營養成分的培養基，如Eagle's MEM、DMEM等。

?無菌操作?：整個培養過程需要在無菌條件下進行，以防止污染。

方法簡介：

公司實驗室分離的人牙周膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

公司實驗室分離的人牙周膜成纖維采用膠原酶-聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞培養的具體操作步驟如下：

?組織處理?：將動物組織從機體中取出，剪碎后用等消化酶處理，使其分散成單個細胞。

?細胞計數?：使用血細胞計數器或其他方法對細胞進行計數，確保細胞密度適中。

?接種培養?：將細胞懸液接種到培養瓶中，加入適量的培養基，置于37℃、5% CO2的培養箱中培養。

?換液和傳代?：定期更換培養液，當細胞達到一定密度時進行傳代培養，以維持細胞的生長狀態。

原代細胞的4種培養方法：

　　① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

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