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原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

人外周血T淋巴細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

人外周血T淋巴分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中出外周血這一新概念。外周血單個核細(xì)胞（PBMC）即外周血中具有單個核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。目前，主要的分離方法是密度梯度離心法，因為血液中各有形成分的比重存在差異，因此得以分離出不同的細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞（T-lymphocyte）來源于骨髓的多能干細(xì)胞（胚胎期則來源于卵黃囊和肝）。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細(xì)胞或前T細(xì)胞遷移到內(nèi)，在激素的誘導(dǎo)下分化成熟，成為具有免疫活性的T細(xì)胞。成熟的T細(xì)胞經(jīng)血流分布至外周免疫器官的依賴區(qū)定居，并可經(jīng)淋巴管、外周血和組織液等進(jìn)行再循環(huán)，發(fā)揮細(xì)胞免疫及免疫調(diào)節(jié)等功能。T細(xì)胞的再循環(huán)有利于廣泛接觸進(jìn)入體內(nèi)的抗原物質(zhì)，加強(qiáng)免疫應(yīng)答，較長期保持免疫記憶。T細(xì)胞的細(xì)胞膜上有許多不同的標(biāo)志，主要是表面抗原和表面受體。這些表面標(biāo)志都是結(jié)合在細(xì)胞膜上的巨蛋白分子。多能干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨蜆忧绑w細(xì)胞（Lymphoid precursor）遷移至，在的誘導(dǎo)下，經(jīng)歷一系列有序的分化過程，逐漸在發(fā)育成熟為識別各種抗原的T細(xì)胞庫。T淋巴細(xì)胞進(jìn)入后首先經(jīng)歷兩個階段：①早期T淋巴細(xì)胞發(fā)育階段，即始祖CIM和CD8雙陰性T淋巴細(xì)胞（double negative cell，DN）分化為CD4和CD8雙陽性T細(xì)胞（double positive cell，DP）；②DP細(xì)胞分別經(jīng)歷陽性選擇階段和陰性選擇階段獲取MHC限制性識別能力和對自身抗原的耐受性，發(fā)育為其表面標(biāo)志為CD4或CD8的單陽性T細(xì)胞（single positive cell，SP），遷往周圍淋巴器官定居。T細(xì)胞是相當(dāng)復(fù)雜的不均一體、又不斷在體內(nèi)更新、在同一時間可以存在不同發(fā)育階段或功能的亞群，但分類原則和命名比較混亂，尚未統(tǒng)一。按免疫應(yīng)答中的功能不同，可將T細(xì)胞分成若干亞群，一致的有：1、輔助性T細(xì)胞（Helper T cells,Th），具有協(xié)助體液免疫和細(xì)胞免疫的功能；2、抑制性T細(xì)胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制細(xì)胞免疫及體液免疫的功能；3、效應(yīng)T細(xì)胞（Effector T cells,Te），具有釋放淋巴因子的功能；4、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有殺傷靶細(xì)胞的功能；5、遲發(fā)反應(yīng)T細(xì)胞（Delayed type hypersensitivity T cells,Td），有參與Ⅳ型反應(yīng)的作用；放大T細(xì)胞（Ta），可作用于Th和Ts，有擴(kuò)大免疫效果的作用；6、原始的或天然T細(xì)胞（Virgin or Natural T cells），他們和抗原接觸后分化成效應(yīng)T細(xì)胞和記憶T細(xì)胞；7、記憶T細(xì)胞（Memory T cell,Tm），有記憶特異性抗原刺激的作用。T細(xì)胞在體內(nèi)存活的時間可數(shù)月至數(shù)年。其記憶細(xì)胞存活的時間則更長。其中，Th細(xì)胞又被稱為CD4+細(xì)胞，因為其在表面表達(dá)CD4（cluster of differentiation 4）。通過與MHCⅡ（主要組織相容性復(fù)合體，major histocompatibility complex）遞呈的多肽抗原反應(yīng)被激活。MHCⅡ在抗原遞呈細(xì)胞（antigen presenting cells,APCs）表面表達(dá)。一旦激活，可以分泌細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)或者協(xié)助免疫反應(yīng)。Tc細(xì)胞又名為CD8+細(xì)胞，其表面表達(dá)CD8。這類細(xì)胞可以通過MHCI與抗原直接結(jié)合。淋巴細(xì)胞主要包括T淋巴細(xì)胞（CD3+），B淋巴細(xì)胞（CD19+），NK細(xì)胞（CD16+CD56+）。

方法簡介：

實驗室分離的人外周血T淋巴經(jīng)CD3免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的人外周血T淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法結(jié)合磁珠分選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含IL-2、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細(xì)胞形態(tài)：圓形

傳代特性：不建議傳代

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)"，這時有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。