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原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

人乳腺成纖維細胞

商品屬性：

細胞簡介：

人乳腺成纖維分離自乳腺組織；乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間，淺筋膜伸向乳腺組織內(nèi)形成條索狀的小葉間隔，一端連于胸肌筋膜，另一端連于皮膚，將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中。乳腺是哺乳動物少數(shù)可以重復(fù)經(jīng)歷生長、功能分化和退化過程的器官之一。纖維結(jié)締組織伸入乳腺組織之間，形成許多間隔，這些纖維結(jié)締組織對乳房起固定作用，而纖維結(jié)締組織是由成纖維細胞構(gòu)成的。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的乳腺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

公司實驗室分離的人乳腺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的人乳腺成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human T lymphoopic virus type I (HTLV- I) ELISA Kit 人類嗜T淋巴細胞Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)ELISA試劑盒

Humanlipidperoxlde,LPOELISAKit 人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Avianencephalomyelitis,AEELISA試劑盒禽腦脊髓炎(AE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

游離脂肪酸化學(xué)比色法定量檢測試劑盒50次

MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein6,IGFBP-6ELISAKit小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠合成酶(NOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠組胺(HIS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠單核細胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP-2/CCL8 ELISA Kit

Porcine acetylcholine receptor aibody (AChRab) ELISA Kit 豬乙酰受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒

ELISA 小鼠心素(mouse ANP) 48T/96T 進口分裝

CLIAKitforLPAb-IgM(HumanLegionellaaibodyIgM)ELISAKit人軍團菌抗體IgM規(guī)格：48T/96T

通用型CMV(CYTOMEGALOVIRUS)病毒定性檢測試劑盒20次

ELISAKitIL-18雞白介素18規(guī)格：48T/96T

IGFBP2重組食蟹猴 IGFBP2 蛋白 (His 標簽) Protein

MLC/Myosin light chain 3 peptide 肌球蛋白輕鏈3抗原 0.5mgMLC/Myosin light chain 3 peptide 肌球蛋白輕鏈3抗原

BTK重組人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 (His 標簽) Protein

CD44 Protein Human 重組人 CD44 蛋白 (Fc 標簽)

NXPH1 Protein Mouse 重組小鼠 Neurexophilin-1 / NXPH1 蛋白 (His 標簽)

人乳腺成纖維細胞MLC/Myosin light chain 3 peptide 肌球蛋白輕鏈3抗原 0.5mgMLC/Myosin light chain 3 peptide 肌球蛋白輕鏈3抗原

CD44 Protein Human 重組人 CD44 蛋白 (Fc 標簽)

IGFBP2重組食蟹猴 IGFBP2 蛋白 (His 標簽) Protein

NXPH1 Protein Mouse 重組小鼠 Neurexophilin-1 / NXPH1 蛋白 (His 標簽)

BTK重組人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 (His 標簽) Protein

原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。