細胞:WRL-68細胞
中文名稱:人正常肝細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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調(diào)節(jié)細胞周期進程(細胞分裂和復(fù)制的過程)中的一種蛋白質(zhì),實際上激活一個關(guān)鍵的抑癌基因,而不是像以前認為的那樣使它失活。(大鼠RIN-m5F細胞 來源:通派細胞庫 大鼠胰島素瘤上皮細胞)
促癌蛋白實際上激活抑癌基因,即一個稱為p16-細胞周期蛋白D通路(癌癥中最常見的遺傳通路突變)促進所有腫瘤細胞的細胞周期進程的一個基本方面。(人BT474細胞 來源:通派細胞庫 人乳癌細胞)
細胞周期蛋白D是在細胞復(fù)制的第一階段期間合成的,被認為有助于促進復(fù)雜的,多階段的過程,其中包括與視網(wǎng)膜母細胞瘤(Rb)蛋白的相互作用,Rb蛋白的功能是通過抑制細胞周期進程防止細胞過度生長,直到細胞準備分裂。RB是一個抑癌基因。(人H1975細胞 來源:通派細胞庫 人非小細胞肺腺癌細胞)
幾個主要的癌癥相關(guān)的Rb突變和功能失調(diào),以及細胞周期蛋白D一直被描述為促進癌癥的一個致癌基因,因為它被認為是通過一種叫做磷酸化的過程,使Rb的抑癌功能失活。(人REH細胞 來源:通派細胞庫 人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞)
精心計算細胞周期進程期間的磷酸鹽添加到Rb的數(shù)量。這多達14個,但發(fā)現(xiàn),細胞周期蛋白D只增加了一個單磷酸,且只有細胞周期進程的早期G1期的14個位點中的一個,基本上有14個不同亞型的Rb。單磷酸鹽的作用是激活RB,不使它失活,這個認知已超過了20年。(小鼠OP9細胞 來源:通派細胞庫 小鼠顱蓋成纖維細胞)
這項研究從根本上改變了對G1期細胞周期調(diào)控和許多癌癥相關(guān)的分子起源的理解。非常重要的是要明白一個基因通路的實際功能和中斷它的后果,尤其是細胞周期蛋白D的多種藥物抑制劑用于乳癌的臨床試驗測試這種情況下。