細胞名稱：NR8383 大鼠肺泡巨噬細胞
組織來源：肺；巨噬細胞；肺泡
培養條件：F-12K +20% FBS
形 態：貼壁和懸浮混合；巨噬細胞
背 景：NR8383來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細胞。細胞在gerbil肺細胞連續培養液存在下培養了大約8-9個月。隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細胞克隆并亞克隆NR8383細胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細胞表現出巨噬細胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，Fc受體，氧化降解；分泌IL-1, TNF beta和IL-6，可重復地響應外源生長因子。NR8383細胞響應*，分泌TGF beta前體。在*刺激下，TGF beta mRNA表達也上升。細胞對內毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生達50%。 即使達到0.001mg/mL的水平，LPS抑制還是無毒且在后續過程中可逆的。 NR8383細胞株提供了高響應的肺泡巨噬細胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細胞相關活性。
NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。
formazan結晶的生成量僅與活NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。
1.接種：用含10％胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.
2.NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)培養：同一般培養條件，培養3－5天（可根據試驗目的和要求決定培養時間）。
3.呈色：培養3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續孵育4小時，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。
4.比色：選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)生長曲線。
