貼壁細胞處理方法

• 細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿*培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。從細胞資源中心獲得細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。

二、 鏡下觀察：

未超過80%匯合度時，將瓶裝的*培養液移入無菌瓶中，留待日后培養用，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養液，放入37℃、5%CO2孵箱培養；

超過80%匯合度時，按要求比例消化傳代。

三、消化方法

1、將瓶裝的*培養液移入無菌瓶中，留待日后培養用。加消化液0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。

2、T25瓶加3ml PBS，洗一次，棄上清，再加1ml消化液消化，顯微鏡下觀察，等細胞*脫離瓶壁分離成單個后，加培養基混勻，離心收集，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶加培養基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培養

四、若客戶收到2ml小管細胞

收到細胞以后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作；然后將小管細胞轉移至T25培養瓶，加入9ml左右含FBS的培養基混勻，放入培養箱過一夜培養后查看細胞匯合度：若未超過80%匯合度，換液繼續培養，據情況傳代或者凍存。若超過80%匯合度，可直接進行傳代（方法同上）

    該細胞使用培養基：1、DMEM(高糖)    2、R1640    3、R1640（改良）4、MEM(EBSS)    5、MEM(NEAA)    6、D/F12    7、F12    8、F12K    9、MaCcoy‘    10、L15    

血清要求：1、20%FBS    2、15%FBS    3、10%FBS    4、5%FBS    5、2.5%FBS    6、15%HS    7、10%HS    8、5%HS    9、2.5%HS    10、10%CCF(滅活)

四、細胞代數：      復蘇人：     

凍存液：常規培養液+20%FBS+8%DMSO

                                                      奧陸生物