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人P物質(SP)ELISA檢測試劑盒

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更新時間:2020-05-12 16:53:26瀏覽次數:304次

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人P物質(SP)ELISA檢測試劑盒●品牌:子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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人P物質(SP)ELISA檢測試劑盒自備物品
1.酶標儀(盡量提前預熱)
2.微量加液器、吸頭
3.蒸餾水或去離子水以及濾紙

樣本的采集及保存
一般的生物標本包括有:
血液、體液、內臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達系統的表達產物等,一般為無菌操作,低溫保存(-80℃、液氮)
一.如果采集的實質器官則要求:
1、 器官實質不能太小
2、 以采集實質性病灶區為佳:如淋巴結、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳
3、 同一病例裝入同一容器,并做好標記
4、 應在0-8℃的低溫儲存和運輸
5、 實質性器官的處理:
5.1、取實質性器官約0.5mg左右,充分剪碎或研磨
5.2、加入約500ul的/生鹽水,充分混勻
5.3、離心5000rmp x10min,去上清
5.4、-20℃保存,作為待檢標本(切勿反復凍融)
二.體液(常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式
1、血液包括血漿和血清,它們的主要區別就是:血清凝血而血漿不凝血,所以它們的處理方式也就不一樣
1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽),采集后立即離心800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存備用;
1.2、如要采集血清,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時后,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存備用;
2、胃液和唾液的采集方式一般現采現用,但是一般飯后半小時內不易采集,因為剛進食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶,的采集的時間時空腹采集;
3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的,即現采現用,但是一般隔夜尿不采集;
4、組織提取液如肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmp x 5min,取上清,-20℃或4℃保存備用;
三、糞便以及天然孔排泄物:采集后一般現用/生鹽水溶解,充分混勻,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存備用;
四、活檢組織一般進行穿刺檢測,zui常見的就是肝活檢,像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進行活檢簡單方便、準確。
五、表達產物的檢測
(一)真核表達產物
1、 細胞上清(分泌性蛋白)
1.2、貼壁細胞或半貼壁,直接將細胞培養上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
1.2、不貼壁細胞,將培養基和細胞轉移至10ml離心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2、 細胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、貼壁細胞或半貼壁,直接將細胞培養上清吸出,然后用001M (pH 7.4)將細胞吹下至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀轉移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2.2、不貼壁細胞,將培養基和細胞轉移至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至另一10ml離心管中,0.01M (pH 7.4)重懸,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清, -20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
(二)原核(大腸桿菌表達系統)表達產物
1、表達上清(非融合性蛋白)
直接將培養物和上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2、菌體裂解物(融合性蛋白)
直接將培養物和上清吸出,10000rmp x10min,棄上清,沉淀用洗一遍,500-800rmp x10min,棄上清,DDW重懸沉淀,冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;

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