小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒標本類型
ELISA 常見的標本一般包括:
● 液體類標本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
● 培養細胞
● 組織標本
這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。
ELISA試劑盒在它的研究、生產及使用中常常會碰到非特異性問題,子科生物技術部根據多年研發和臨床經驗總結如下:
小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒
1、試劑盒特異性因素
1)固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各產品的質量差異很大。因此,在選擇試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進行認證,評估。
2)包被物的純度。在酶聯免疫測定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術條件的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達到100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡可能提高純度,提高特異性。目前使用的包被抗原一般為合成多肽抗原。
3)包被抗體的效價。具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決定試劑特異性的重要方面。
4 )封閉。是ELISA中重要的一步,目的是封閉固相載體表面尚未被所占據的空隙[2],減少后續步驟中非特異性蛋白的干擾。
2、操作過程中的問題造成假陽性
1)加樣
對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋,如果加樣不準就會造成誤差,尤其當稀釋倍數大時,很小的誤差,會導致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽性)標本呈陽性(或陰性)。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統處理標本,可較好地避免以上誤差。
2)洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步,應引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作,得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關,ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。
3) 溫育
每種試劑都有其佳反應模式,其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應時間長,會造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發,板上應加蓋。
4)酶標儀判讀
作為記錄測定結果的儀器,酶標儀的性能穩定與否,決定結果的可靠度。首先酶標儀應定期進行保養,對濾光片要定期校正;其次酶標儀波長設置要正確,使用雙波長,一個檢測波長,一個參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標儀讀數時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同。
小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒實驗原理:用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

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