日韩午夜在线观看,色偷偷伊人,免费一级毛片不卡不收费,日韩午夜在线视频不卡片

上海永葉生物科技有限公司

CaCl2感受態(tài)細(xì)胞的制備的實(shí)驗(yàn)步驟

時(shí)間:2011-11-7閱讀:659
分享:

·CaCl2感受態(tài)細(xì)胞的制備的實(shí)驗(yàn)步驟

  1.前夜接種受體菌(DH5α或DH10B),挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過夜(約16小時(shí));

  2.取1ml過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100mlLB培養(yǎng)基中,在37℃搖床上劇烈振蕩培養(yǎng)約2.5-3小時(shí)(250-300rpm);

  3.將0.1MCaCl2溶液置于冰上預(yù)冷;

  以下步驟需在超凈工作臺(tái)和冰上操作

  4.吸取1.5ml培養(yǎng)好的菌液至1.5ml離心管中,在冰上冷卻10分鐘;

  5.4℃下3000g冷凍離心5分鐘;

  6.棄去上清,加入100μl預(yù)冷0.1MCaCl2溶液,用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻,使細(xì)胞重新懸浮,在冰放置20分鐘;

  7.4℃下3000g冷凍離心5分鐘;

  8.棄去上清,加入100μl預(yù)冷0.1MCaCl2溶液,用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻,使細(xì)胞重新懸浮;

  9.細(xì)胞懸浮液可立即用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)或添加冷凍保護(hù)劑(15%-20%甘油)后超低溫冷凍貯存?zhèn)溆茫ǎ?0℃)。

  ·電轉(zhuǎn)化法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)步驟

  1.前夜接種受體菌(DH5α或DH10B),挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過夜;

  2.取2ml過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于200mlLB培養(yǎng)基中,在37℃搖床上劇烈振蕩培養(yǎng)至OD600=0.6(約2.5-3小時(shí));

  3.將菌液迅速置于冰上。以下步驟務(wù)必在超凈工作臺(tái)和冰上操作

  4.吸取1.5ml培養(yǎng)好的菌液至1.5ml離心管中,在冰上冷卻10分鐘;

  5.4℃下3000g冷凍離心5分鐘;

  6.棄去上清,加入1500μl冰冷的10%甘油,用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻,使細(xì)胞重新懸浮;

  7.4℃下3000g冷凍離心5分鐘

  8.棄去上清,加入750μl冰冷的10%甘油,用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻,使細(xì)胞重新懸浮;

  9.4℃下3000g冷凍離心5分鐘

  10.加入20μl冰冷10%的甘油,用移液器輕輕上下吸動(dòng)打勻,使細(xì)胞重新懸浮;

  11.立即使用或迅速置于-70℃超低溫保存。

  附注:

  影響感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率的因素及實(shí)際操作過程中應(yīng)注意的事項(xiàng):

  1.細(xì)菌的生長狀態(tài):實(shí)驗(yàn)中應(yīng)密切注視細(xì)菌的生長狀態(tài)和密度,盡量使用對數(shù)生長期的細(xì)胞(一般通過檢測OD600來控制。DH5α菌株OD600為0.5時(shí)細(xì)胞密度是5×107/ml);

  2.所有操作均應(yīng)在無菌條件和冰上進(jìn)行;

  3.經(jīng)CaCl2處理的細(xì)胞,在低溫條件下,一定的時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)化率隨時(shí)間的推移而增加,24小時(shí)達(dá)到zui高,之后轉(zhuǎn)化率再下降(這是由于總的活菌數(shù)隨時(shí)間延長而減少造成的);

  4.化合物及無機(jī)離子的影響:在Ca2+的基礎(chǔ)上聯(lián)合其他二價(jià)金屬離子(如Mn2+或Co2+)、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細(xì)菌,可使轉(zhuǎn)化效率大大提高(100-1000倍);

  5.所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學(xué)物質(zhì)的存在可能大大降低細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率;

  6.質(zhì)粒的大小及構(gòu)型的影響:用于轉(zhuǎn)化的應(yīng)主要是超螺旋的DNA;

  7.一定范圍內(nèi),轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度呈正比;

 

會(huì)員登錄

×

請輸入賬號(hào)

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),環(huán)保在線對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。

溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

在線留言
主站蜘蛛池模板: 湟中县| 二连浩特市| 鸡东县| 枣阳市| 涿州市| 东乌珠穆沁旗| 台北市| 太仆寺旗| 饶河县| 高台县| 福泉市| 金华市| 萍乡市| 当涂县| 江华| 浦东新区| 塔河县| 克什克腾旗| 张家界市| 灌南县| 盐亭县| 涿州市| 麻城市| 石城县| 和硕县| 湘西| 肇东市| 和林格尔县| 天祝| 西乌珠穆沁旗| 图木舒克市| 辽中县| 郁南县| 武宣县| 密山市| 德江县| 三都| 无锡市| 延川县| 西昌市| 融水|